HIV蛋白酶抑制劑在頸動(dòng)脈導(dǎo)絲損傷內(nèi)膜增生中新機(jī)制探討.pdf

1、研究背景:
　　介入損傷后再狹窄是臨床常見(jiàn)問(wèn)題，影響心腦血管疾病的長(zhǎng)期療效，因此有必要需要新的工具新的靶點(diǎn)來(lái)解決該臨床困擾。HIV蛋白酶抑制劑Saquinavir(SQV)作為第一代批準(zhǔn)的抗艾滋病藥物，近年來(lái)在臨床上發(fā)現(xiàn)它在腫瘤領(lǐng)域以及對(duì)抗急性炎癥反應(yīng)中的新作用，最近的研究表明它對(duì)肺動(dòng)脈高壓以及平滑肌增殖通路同樣具有好的療效。血管內(nèi)膜新生是一個(gè)慢性炎癥反應(yīng)過(guò)程，平滑肌細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞相互作用，增殖的平滑肌細(xì)胞、浸潤(rùn)的巨噬細(xì)

2、胞及細(xì)胞外基質(zhì)沉積構(gòu)成新生內(nèi)膜的主要成分。前期數(shù)據(jù)（未發(fā)表）表示Saquinavir在體外對(duì)于半胱氨酸蛋白酶V(Cathepsin V)有特異性抑制作用，人體Cathepsin V與小鼠Cathepsin L具有高度同源性。因此我們提出假說(shuō)Saquinavir通過(guò)部分抑制Cathepsin L以及炎癥反應(yīng)來(lái)抑制內(nèi)膜增生。
　　研究方法:
　　根據(jù)藥物半衰期，術(shù)前3天術(shù)后28天每天予以saquinavir(2.5mg/kg)和

3、Ritonavir(0.0625mg/kg)腹腔注射，第28天取頸總動(dòng)脈，H-E染色，計(jì)算內(nèi)中膜比值評(píng)估內(nèi)膜增生程度。運(yùn)用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)SQV干預(yù)后早期(6h)頸動(dòng)脈局部各炎癥因子變化水平。通過(guò)免疫熒光，蛋白活性及mRNA檢測(cè)頸動(dòng)脈損傷后Cathepsin L的變化以及SQV干預(yù)是否對(duì)其產(chǎn)生影響。通過(guò)基因敲除及腺病毒局部轉(zhuǎn)染等技術(shù)確定Cathepsin L在頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生中的作用。體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)炎癥刺激對(duì)內(nèi)皮和平滑肌的影響，以及S

4、QV能否抑制炎癥引起的細(xì)胞行為改變。
　　研究結(jié)果:
　　SQV/RTV作用可顯著抑制頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生，抑制頸動(dòng)脈局部平滑肌含量以及巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。頸動(dòng)脈導(dǎo)絲損傷后可引起局部Cathepsin L活性，蛋白表達(dá)及mRNA水平顯著升高。SQV可以抑制局部Cathepsin L活性，蛋白表達(dá)以及mRNA水平的升高。頸動(dòng)脈導(dǎo)絲損傷6h可誘導(dǎo)IL-6，TLR-4，HMGb1，CCR2 mRNA表達(dá)水平的升高，這些升高可被SQV干預(yù)顯著抑