束骨姜黃醇對舌癌Tca8113細(xì)胞系增殖、凋亡的影響及其相關(guān)機制研究.pdf

1、目的：舌癌是口腔頜面部最為多見的惡性腫瘤，近年來在世界范圍內(nèi)其發(fā)病率逐年升高，并且其發(fā)病年齡越來越小，同時其惡性程度也越來越高。容易發(fā)生早期頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且轉(zhuǎn)移率較高為舌癌的主要特點之一。目前舌癌的首選治療方式是手術(shù)治療，同時，術(shù)前、術(shù)后常需配合化療以提高療效，但是傳統(tǒng)的化療通常存在著腫瘤細(xì)胞耐藥、化療藥物毒副作用大患者難以耐受等影響治療效果的不利因素，所以研究和開發(fā)治療惡性腫瘤的新藥，成為惡性腫瘤治療領(lǐng)域研究的重點。目前，國內(nèi)外學(xué)者

2、越來越重視從動植物、礦物質(zhì)、海洋生物等天然物質(zhì)中尋找高效低毒的治療惡性腫瘤的藥物，并已取得一定成績。束骨姜黃醇（Xanthorrhizol）是從姜黃屬植物印尼莪術(shù)(C.xanthorrhiza)根莖的揮發(fā)油中提取出來的一種主要成份，目前研究顯示，束骨姜黃醇對宮頸癌、乳腺癌等惡性腫瘤有明顯的抑制作用。本課題通過體外培養(yǎng)舌癌Tca8113細(xì)胞，研究束骨姜黃醇對舌癌Tca8113細(xì)胞增殖及凋亡的影響，探討束骨姜黃醇在舌癌治療中的作用機制，為舌

3、癌的化學(xué)治療提供實驗依據(jù)。
　　 方法：將復(fù)蘇后的舌癌Tca8113細(xì)胞置于37℃，CO2飽和濕度5％的常規(guī)條件下培養(yǎng)，待細(xì)胞進(jìn)入對數(shù)生長期后用于實驗。
　　 1.流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期分布：收集不同濃度束骨姜黃醇作用0h、12h、24h、48h、72h的舌癌Tca8113細(xì)胞及對照組細(xì)胞，冷PBS漂洗。預(yù)冷70％乙醇4℃固定，上機檢測前離心去除固定液，用0.5％胃蛋白酶消化，碘化丙錠(ProPidi

4、um Iodide，PI:50mg/L Trinton X-1001.0％)室溫避光染色。流式細(xì)胞儀上機檢測，應(yīng)用軟件進(jìn)行分析。
　　 2.流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測Bcl-2、Bax基因蛋白的表達(dá)情況：收集經(jīng)不同濃度束骨姜黃醇作用0h、12h、24h、48h、72h的舌癌Tca8113細(xì)胞及對照組細(xì)胞，按常規(guī)方法進(jìn)行熒光標(biāo)記，流式細(xì)胞儀檢測熒光強度，以平均熒光強度道數(shù)表示蛋白的表達(dá)量。
　　 結(jié)果：
　　 1.束

5、骨姜黃醇對舌癌Tca8113細(xì)胞周期的影響。
　　 1.1 20μ.mol/L、40μmol/L、60μmol/L束骨姜黃醇分別作用于舌癌Tca8113細(xì)胞12h后，各用藥組S+G2/M期細(xì)胞周期百分比與對照組的相比，差異具有顯著性(P＜0.01)；藥物作用24h后，各用藥組S+G2/M期細(xì)胞細(xì)胞周期百分比與對照組相比，差異具有顯著性(P＜0.05)；藥物作用48h后，各用藥組S+G2/M期細(xì)胞細(xì)胞周期百分比與對照組相比，差異具

6、有顯著性(P＜0.05)；藥物作用72h后，各用藥組S+G2/M期細(xì)胞細(xì)胞周期百分比與對照組相比，差異具有顯著性(P＜0.01)。各用藥組與只加二甲基亞砜(DMSO)而不加藥物的各溶劑對照組相比，差異具有顯著性(P＜0.05)。不同時間點各用藥物組間比較，除用藥72h后，20μmol/L組和40μmol/L組之間差異無顯著性外(P＞0.05)，其余各時間點各組比較差異均具有顯著性(P＜0.05)。
　　 1.2 各用藥濃度組作用

7、不同時間S+G2/M期細(xì)胞周期百分比的方差分析表明，20μmol/L組中，48h與72h兩時間點之間比較，差異無顯著性(P＞0.05)，其余各時間點之間，差異具有顯著性(P＜0.05)；40μmol/L組中，48h與72h兩時間點之間比較，差異無顯著性(P＞0.05)，其余各時間點之間，差異具有顯著性(P＜0.05)；60μmol/L組中，各時間點之間比較，差異均具有顯著性(P＜0.05)。
　　 1.3 經(jīng)不同濃度藥物作用不同

8、時間后，G2/M期細(xì)胞周期百分比變化無明顯規(guī)律性。
　　 2.流式細(xì)胞儀檢測束骨姜黃醇對舌癌Tca8113細(xì)胞細(xì)胞凋亡的影響。
　　 2.1 20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L束骨姜黃醇作用于舌癌Tca8113細(xì)胞12h后，細(xì)胞凋亡率與對照組相比，差異具有顯著性(P＜0.01)；藥物作用24h后，細(xì)胞凋亡率與對照組相比，差異具有顯著性(P＜0.01)；藥物作用48h后，細(xì)胞凋亡率與對照組相比，差異具有顯

9、著性(P＜0.01)；藥物作用72h后，細(xì)胞凋亡率與對照組相比，差異具有顯著性(P＜0.01)；各用藥組與只加二甲基亞砜(DMSO)而不加藥物的各溶劑對照組相比，差異具有顯著性(P＜0.01)。不同時間點各用藥組間比較，除用藥12h后，20μ,mol/L組和40μmol/L組之間差異無顯著性外(P＞0.05)，其余個時間點各組比較差異均具有顯著性(P＜0.01)。
　　 2.2 各用藥濃度組作用不同時間細(xì)胞凋亡的方差分析表明，除

10、20μmol/L組內(nèi)48h與72h之間比較，差異無顯著性外(P＞0.05)，其余各組中各時間點間比較，差異均具有顯著性(P＜0.05)。
　　 3.FCM檢測束骨姜黃醇作用于舌癌Tca8113細(xì)胞后凋亡相關(guān)基因蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)。
　　 3.1 Bcl-2蛋白表達(dá)量：
　　 3.1.1 12h、24h組蛋白表達(dá)分別與對照組相比，除20μmol/L組外，其余各組差異具有顯著性(P＜0.05);48h組蛋白

11、表達(dá)與對照組相比，差異具有顯著性(P＜0.05);72h組蛋白表達(dá)與對照組相比，差異具有顯著性(P＜0.05)；各用藥組與只加二甲基亞砜(DMSO)而不加藥物的各溶劑對照組相比，差異具有顯著性(P＜0.05)；不同時間點各用藥組之間比較，差異具有顯著性(P＜0.05)。
　　 3.1.2 各用藥濃度組作用不同時間蛋白表達(dá)的方差分析表明，20μmol/L組內(nèi)各時間點之間差異不顯著(P＞0.05)，40μmol/L組中除48h與72

12、h之間差異無顯著性(P＞0.05)外，其余各時間點間差異均顯著(P＜0.05)，60μmol/L組中各時間點間差異均顯著(P＜0.05)。
　　 3.2 Bax蛋白表達(dá)量：各用藥濃度組作用不同時間后，各組Bax蛋白表達(dá)量經(jīng)析因設(shè)計的方差分析表明，時間因素與劑量因素在束骨姜黃醇對細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)量的影響中，不存在交互效應(yīng)(P＞0.05)；逐一分析藥物作用后，不同時間和不同藥物濃度對Bax蛋白表達(dá)量的影響，結(jié)果表明實驗組與對照組的

13、差異不具備顯著性(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.束骨姜黃醇能夠顯著影響舌癌Tca8113細(xì)胞的細(xì)胞周期，使細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期，從而達(dá)到抗腫瘤的目的。該藥物對細(xì)胞周期的阻滯作用呈時間和劑量依賴關(guān)系。
　　 2.束骨姜黃醇在一定濃度范圍內(nèi)能夠呈時間、濃度依賴性地誘導(dǎo)舌癌Tca8113細(xì)胞凋亡。
　　 3.束骨姜黃醇能夠顯著影響凋亡相關(guān)基因蛋白Bcl-2的表達(dá)，使Bcl-2蛋白表達(dá)逐漸降低，