肝動(dòng)脈化延遲對(duì)移植肝影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分肝移植動(dòng)脈化延遲模型的建立及初步研究 目的：建立簡(jiǎn)單的大鼠自體肝移植動(dòng)脈化延遲模型,并初步研究動(dòng)脈化延遲對(duì)移植肝的影響。 方法： 1.動(dòng)物模型的建立。采用經(jīng)腹主動(dòng)脈灌注法對(duì)肝臟進(jìn)行冷灌注,之后夾閉肝總動(dòng)脈,切斷胃十二指腸動(dòng)脈并開(kāi)放其起始部。門(mén)靜脈復(fù)流結(jié)束無(wú)肝期,肝總動(dòng)脈血管夾精確控制(肝動(dòng)脈復(fù)流)肝動(dòng)脈化延遲時(shí)間。 2.研究動(dòng)脈化延遲對(duì)移植肝影響。采用TUNEL法檢測(cè)冷灌注后和肝動(dòng)脈化延遲(1小時(shí)

2、)兩個(gè)時(shí)間段肝細(xì)胞、膽管細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果：共做實(shí)驗(yàn)56例次,手術(shù)成功率98％(55/56)。冷灌注后光鏡下顯示肝臟灌注良好,未見(jiàn)紅細(xì)胞殘留。門(mén)靜脈復(fù)流后見(jiàn)胃十二指腸動(dòng)脈開(kāi)口處有少量血液返流,光鏡下見(jiàn)小葉間動(dòng)脈充滿紅細(xì)胞。TUNEL法顯示肝動(dòng)脈化延遲1小時(shí)的凋亡肝細(xì)胞及凋亡膽管細(xì)胞較冷灌注完畢時(shí)明顯升高(P<0.05),分別為64.00±14.17,1.14±1.31(個(gè)/視野)和123.50±38.20,6.52±3.42(

3、個(gè)/視野)。 結(jié)論：本模型是研究肝動(dòng)脈化延遲對(duì)移植肝影響較為理想的模型。肝動(dòng)脈化延遲1小時(shí),移植肝凋亡的肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞均明顯升高,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡增多的原因可能為肝動(dòng)脈缺血時(shí)間延長(zhǎng)和門(mén)靜脈血返流、淤積于肝動(dòng)脈,但其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。 第二部分肝動(dòng)脈第二次灌注對(duì)動(dòng)脈化延遲供肝的保護(hù)作用 目的：了解肝動(dòng)脈第二次灌注利多卡因、肝素、阿拓莫蘭和生理鹽水混合液對(duì)動(dòng)脈化延遲供肝的保護(hù)作用,為尋找預(yù)防或減少動(dòng)脈化延遲對(duì)移植

4、肝影響的方法奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和標(biāo)本采集：健康、成年、SPF級(jí)純系SD大鼠36只,隨機(jī)分成4組,A組為假手術(shù)組；B組為門(mén)靜脈、肝動(dòng)脈同時(shí)開(kāi)放組；C組為肝動(dòng)脈化延遲組；D組為肝動(dòng)脈第二次灌注組。B、C、D組在門(mén)靜脈開(kāi)放1小時(shí)后留取標(biāo)本。 2.觀察指標(biāo)：標(biāo)本行病理形態(tài)學(xué)檢查及TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)。3.所有數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示,用SPSS13統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,組間比較采用重復(fù)測(cè)量

5、數(shù)據(jù)的方差分析(SNK)。 結(jié)果： 1.病理變化:A組無(wú)明顯病理改變。C組改變最明顯,D組次之,B組較輕。 2.凋亡情況:A組有少量的肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞凋亡,與B、C、D組比較均有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。冷灌注后后凋亡肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞明顯增多,B、C、D組中,B組細(xì)胞凋亡最少,C組最多,D組居中,C組與D組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；B組與D組比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：經(jīng)肝動(dòng)脈第二次灌注利多卡因、肝素、阿拓莫蘭和生理鹽水