臺(tái)灣線蟲草子實(shí)體的人工誘導(dǎo)優(yōu)化培養(yǎng)及部分化學(xué)成分分析.pdf

1、臺(tái)灣線蟲草（Ophiocordyceps formosana Kobayasi& Shimizu）是寄生于鞘翅目幼蟲擬步甲上的一種蟲草，其子實(shí)體具有顯著的抗腫瘤活性，但是子實(shí)體形成的遺傳背景及主要的化學(xué)成分氨基酸和活性化合物核苷類成分并不清楚。本文在分析臺(tái)灣線蟲草的無性型黃山被毛孢（Hirsutella huangshanensis）交配型基因的基礎(chǔ)上，對(duì)子實(shí)體的人工誘導(dǎo)優(yōu)化培養(yǎng)工藝及部分化學(xué)成分進(jìn)行了研究，主要內(nèi)容包括:選用實(shí)驗(yàn)室保存

2、的34株單次生子囊孢子菌株，運(yùn)用PCR擴(kuò)增技術(shù)對(duì)其交配型類型進(jìn)行驗(yàn)證，并對(duì)不同交配型基因菌株分別進(jìn)行SDAY平板培養(yǎng)和蟲專大米培養(yǎng)基子實(shí)體人工培養(yǎng)，記錄其生長(zhǎng)差異，篩選出子實(shí)體栽培最優(yōu)菌株;同時(shí)選用子實(shí)體栽培最優(yōu)菌株進(jìn)行子實(shí)體培養(yǎng)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，獲得臺(tái)灣線蟲草最佳培養(yǎng)工藝;并利用氨基酸分析儀和高效液相色譜儀對(duì)其3種人工培養(yǎng)物的氨基酸和核苷類含量進(jìn)行分析比較。結(jié)果為將來臺(tái)灣線蟲草的大規(guī)模人工栽培和應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。
　　PCR擴(kuò)增結(jié)果顯

3、示:34株單次生子囊孢子菌株中有16株同時(shí)含有MAT1-1和MAT1-2兩種類型的交配型基因，14株只含有MAT1-1基因，4株只含有MAT1-2基因。不同交配型菌株人工培養(yǎng)結(jié)果表明，同時(shí)含有兩種交配型基因的菌株的菌落生長(zhǎng)直徑(7.00mm)和子實(shí)體形成概率(81.25％)以及子實(shí)體產(chǎn)量（1.62 g·瓶-1）均明顯高于只含有一種交配型基因的菌株。綜上所述，同時(shí)含有兩種交配型基因的菌株在無性階段和有性階段的生長(zhǎng)狀況均優(yōu)于只含有一種交配型

4、基因的菌株，更適合進(jìn)行子實(shí)體人工培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究。
　　子實(shí)體人工培養(yǎng)最佳工藝的確定:選用子實(shí)體栽培最優(yōu)菌種FCC15，以大米為子實(shí)體栽培基質(zhì)，子實(shí)體栽培營(yíng)養(yǎng)液(C)作為栽培營(yíng)養(yǎng)液，按每瓶20g大米、40mL營(yíng)養(yǎng)液的量配制栽培培養(yǎng)基;液體搖瓶種子液接種量為10mL/瓶，接種后置于25℃人工培養(yǎng)箱中，菌絲體生長(zhǎng)前期完全避光，菌絲鋪滿后（約20～30d）給予200～400lux連續(xù)光照，待子實(shí)體生長(zhǎng)健壯至幾乎不再生長(zhǎng)時(shí)采收。
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5、種人工培養(yǎng)物—搖瓶菌絲體、深層發(fā)酵菌絲體和子實(shí)體中氨基酸和核苷類含量比較結(jié)果表明，搖瓶菌絲體中的氨基酸總量和必需氨基酸總量含量最高，分別為33.23g/100g和10.97g/100g，其次是深層發(fā)酵菌絲體，其含量分別為25.28 g/100g和8.42g/100g，子實(shí)體中含量最低，分別為23.87 g/100g和7.98g/100g;搖瓶菌絲體中腺苷、鳥苷、尿苷和胞苷以及次黃嘌呤、胞嘧啶的含量最高，分別為0.56 mg/g,0.19