人工培育的長(zhǎng)座線蟲(chóng)草抗菌活性研究及其化學(xué)成分分析.pdf

1、長(zhǎng)座線蟲(chóng)草Ophiocordyceps longissima(Kobayasi) Sung et al.是寄生于同翅目蟬若蟲(chóng)上的一種重要的蟲(chóng)生真菌，其無(wú)性型為長(zhǎng)座被毛孢。本文對(duì)長(zhǎng)座線蟲(chóng)草人工培養(yǎng)物的抗菌活性及其化學(xué)成分進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，主要內(nèi)容包括：對(duì)其無(wú)性型菌株RCEF3891進(jìn)行了液體和固體培養(yǎng)，用4種處理方法對(duì)人工培養(yǎng)子實(shí)體和液體搖瓶菌絲體進(jìn)行浸提，采用杯碟法對(duì)6種細(xì)菌和1種真菌進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，檢測(cè)浸提物的抑菌活性，選出指示菌，

2、并對(duì)抑菌活性高的提取物中的活性組分進(jìn)行了分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定；同時(shí)，測(cè)定了人工培養(yǎng)物的部分有效成分并應(yīng)用LC-MS對(duì)甲醇提取物進(jìn)行了成分分析。
　　抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明：人工培養(yǎng)長(zhǎng)座線蟲(chóng)草子實(shí)體和菌絲體的水提物和甲醇提取物對(duì)蘇云金芽孢桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌有抑菌作用，特別是對(duì)后者的抑制作用較為明顯。冬蟲(chóng)夏草菌絲體的水提物對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和綠膿桿菌有較弱的抑制作用，對(duì)其他供試菌物沒(méi)有抑制作用。3種人工培養(yǎng)物的乙

3、酸乙酯提取物對(duì)供試菌均沒(méi)有抑菌活性。人工培養(yǎng)長(zhǎng)座線蟲(chóng)草子實(shí)體和搖瓶菌絲體的提取物在80℃水浴加熱后，仍具有抑菌活性，表明其抑菌活性成分有較高的耐熱性。
　　實(shí)驗(yàn)采用半制備型色譜柱對(duì)提取物組分進(jìn)行初步分離，以抑制白色念珠菌為測(cè)定指標(biāo)對(duì)分離組分進(jìn)行了活性測(cè)定，確定出一種活性組分p-1。試驗(yàn)進(jìn)一步用分析柱分離，成功制備出該活性組分。
　　經(jīng)LC-TOF-MS和NMR數(shù)據(jù)解析得知，化合物p-1的分子式為C21H39NO6，系統(tǒng)學(xué)名為

4、2S，3R，4R，6E-2-氨基-3，4-二羥基-2-羥甲基l-14-氧-6-二十烯酸，即為多球殼菌素（Myriocin），該化合物在長(zhǎng)座線蟲(chóng)草屬首次發(fā)現(xiàn)且含量較高。
　　對(duì)長(zhǎng)座線蟲(chóng)草三種人工培養(yǎng)物（子實(shí)體、固體平板菌絲體和孢梗束）的部分成分分析結(jié)果表明：菌絲體中灰分總量最高，顯著高于孢梗束和子實(shí)體中灰分的含量。長(zhǎng)座線蟲(chóng)草搖瓶菌絲體中氨基酸總量（26.68 g/100g）、必須氨基酸總量最高（7.4g/100g），顯著高于孢梗束（

5、22.94、8.03 g/100g）和子實(shí)體（20.81、7.97 g/100g）中氨基酸、必須氨基酸的總量。三種人工培養(yǎng)物的麥芽糖含量相當(dāng)，差異不顯著，子實(shí)體中海藻糖和葡萄糖含量最高。
　　通過(guò)對(duì)液體搖瓶菌絲體中多球殼菌素含量的培養(yǎng)優(yōu)化：確定12~15d為最佳培養(yǎng)時(shí)間，通過(guò)對(duì)五種不同液體培養(yǎng)基的篩選，確定出培養(yǎng)液Ⅴ為最優(yōu)培養(yǎng)基；進(jìn)一步對(duì)7種碳源和7種氮源的篩選，確定出麩皮和酵母粉為最佳碳源和氮源。
　　對(duì)長(zhǎng)座線蟲(chóng)草菌絲體和