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文檔簡(jiǎn)介
1、玄參為玄參科植物玄參ScrophularianingpoensisHemsl.的根。重慶市南川區(qū)目前已成為全國(guó)最大的玄參種植基地,是全國(guó)玄參的重點(diǎn)產(chǎn)區(qū)。黃連屬毛莨科黃連CoptischinensisFranch.的根。黃連為重慶石柱縣的地道中藥材。
為了更好的開發(fā)利用玄參和黃連的藥用價(jià)值,發(fā)展當(dāng)?shù)刂兴幃a(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì),本文對(duì)玄參和黃連進(jìn)行了化學(xué)成份和生物活性研究。本研究?jī)?nèi)容包括:
1.提取分離實(shí)驗(yàn)
1.
2、1玄參化學(xué)成分的分離
取玄參根,粉碎,用70%的乙醇滲漉提取,再經(jīng)D101大孔樹脂分離洗脫為30%,60%和90%乙醇的三部分。此三部分利用硅膠柱層析、HSCCC色譜等手段從玄參中分離出9個(gè)化合物,經(jīng)波譜數(shù)據(jù)鑒定結(jié)構(gòu)確定為哈巴苷、桃葉珊瑚苷、類葉升麻苷、升麻素苷、蔗糖、肉桂酸、哈巴俄苷、安格洛苷C和二十七烷。其中60%乙醇部分,用高速逆流色譜(HSCCC)技術(shù)在氯仿-正丁醇-甲醇-水(4∶1∶3∶2)體系中分離,首次同時(shí)分
3、離出高純度哈巴俄苷(98%)和安格洛苷C(98.5%),此為這兩化合物分離提供了一條新的簡(jiǎn)單容易分離手段。
1.2黃連化學(xué)成分的分離
本實(shí)驗(yàn)采用HSCCC法,在CHCl3-MeOH-0.2MHCl(4∶1.5∶2)體系中分離黃連浸膏,直接一步分離出小檗堿(純度為80.56%)、黃連堿(純度為82%)、藥根堿(純度為82%)、巴馬?。兌葹?8%)及表小檗堿(純度為85.65%),各單一斑點(diǎn)的流分再分別過Sep
4、hadexLH-20柱純化,以氯仿/甲醇系統(tǒng)洗脫,可分別得到純度較高的5個(gè)生物堿(98%)。
2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
2.1體外的降糖活性初步研究
本實(shí)驗(yàn)對(duì)玄參和黃連化學(xué)成分的降糖活性初步研究,選擇用HepG2細(xì)胞。從玄參中分離得到的各浸膏組分和化合物均能在不同程度上促進(jìn)HepG2細(xì)胞中葡萄糖消耗。過大孔樹脂分離的60%乙醇組分為玄參降糖活性的主要活性部位。在0.1μg/ml~2.5μg/ml濃度范圍內(nèi),
5、篩選玄參和黃連中的各個(gè)化合物的降糖活性,以小檗堿的葡萄糖消耗能力最高,對(duì)促進(jìn)HepG2細(xì)胞中葡萄糖消耗具有一定的劑量依賴關(guān)系;哈巴俄苷和黃連堿對(duì)促進(jìn)HepG2細(xì)胞中葡萄糖消耗相對(duì)較好。
2.2ⅡepG2細(xì)胞內(nèi)活性氧清除實(shí)驗(yàn)
采用高糖刺激的方法來建立ROS模型,用熒光法測(cè)定,依據(jù)藥物的熒光強(qiáng)度值和抑制率的結(jié)果可知,玄參和黃連中化合物對(duì)細(xì)胞內(nèi)活性氧都有抑制作用,只是抑制的程度不同。在1~10μg/ml的藥物濃度時(shí)
6、,與高糖組相比,化合物中的小檗堿和黃連堿有較好的抗氧化活性,其在一定濃度下能夠較好的抑制高糖刺激的活性氧升高,且呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系;同時(shí),黃連中分離的生物堿比玄參中的化合物的抗氧化能力基本上要強(qiáng)。
2.3玄參化學(xué)成分對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的抑制作用
血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angiotensinconvertingenzyme,ACE)在腎素-血管緊張素系統(tǒng)中具有調(diào)控血壓的作用。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜(HPLC
7、)的方法測(cè)定ACE-HHL-ACEI反應(yīng)體系產(chǎn)物Hip,計(jì)算抑制率,驗(yàn)證玄參的降壓機(jī)制是否與抑制ACE活力相關(guān)。實(shí)驗(yàn)中,考察玄參中各化合物在同一濃度(2mg/ml)下,加入不同體積(體積X為30、60和120μl)對(duì)ACE活性的抑制作用。結(jié)果表明各化合物在同一濃度加入不同體積對(duì)ACE活性的抑制作用有劑量關(guān)系,加入體積越大,抑制效果越好,但與卡托普利的抑制作用相比,玄參中各化合物在此濃度下的ACE活力的抑制率明顯較低(P<0.01),說明
8、玄參中各化合物降壓效果一般。
3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
3.1黃連的化合物對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍保護(hù)作用的研究
本實(shí)驗(yàn)考察了黃連中的5個(gè)生物堿和8-烷基小檗堿衍生物(8-BBR-Cn,n=4,8,12和16)對(duì)大鼠胃潰瘍保護(hù)作用的可能機(jī)制。
在無水乙醇致胃黏膜損傷性模型中,與模型對(duì)照組相比,大鼠胃黏膜損傷指數(shù)和抑制率的考察結(jié)果可知,表小檗堿、巴馬汀和藥根堿(25、50、100mg/kg)均無明顯的抑制
9、乙醇誘導(dǎo)的大鼠急性胃黏膜損傷。而西咪替?。?0mg/kg,陽性對(duì)照組),黃連堿、小檗堿和8-烷基小檗堿衍生物(25、50、100mg/kg)均能顯著的抑制乙醇誘導(dǎo)的大鼠急性胃黏膜損傷(P<0.001)。對(duì)胃黏膜的前列腺素E2(PGE2)和一氧化氮合酶(NOS)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中,黃連堿、小檗堿和8-烷基小檗堿衍生物對(duì)乙醇誘導(dǎo)的大鼠急性胃黏膜損傷的保護(hù)作用可能是通過PGE2和NOS的通路來調(diào)節(jié)改善,而8-十六烷基小檗堿可明顯抑制乙醇誘導(dǎo)的大鼠急性
10、胃黏膜損傷(P<0.001),其抑制效果最好。
幽門結(jié)扎法復(fù)制大鼠胃潰瘍模型中,與模型對(duì)照組相比,黃連堿、小檗堿和8-烷基小檗堿衍生物(25、50、100mg/kg)能顯著減少其胃液量、降低胃液總酸度和胃蛋白酶活性(P<0.001),且呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。灌胃給藥100mg/kg的黃連堿、小檗堿和8-烷基小檗堿衍生物也可顯著抑制H+K+-ATP酶活力(P<0.05,P<0.01),其結(jié)果是抑制由于幽門結(jié)扎手術(shù)引起的胃酸分泌過
11、多,從而使藥物對(duì)胃潰瘍有保護(hù)作用。在影響NO上,各給藥組(25、50、100mg/kg)均顯著促進(jìn)NO生成(P<0.05,P<0.01)。在影響MDA上,黃連的化合物中僅有黃連堿對(duì)幽門結(jié)扎型消化性潰瘍大鼠MDA的抑制有顯著的作用(P<0.01)。
3.2大鼠長(zhǎng)期食用黃連中的巴馬汀對(duì)其體重調(diào)節(jié)和性別偏好的影響
在實(shí)驗(yàn)90天考察中,各組大鼠每10天稱體重1次,根據(jù)體重調(diào)節(jié)給藥量。與空白雌性大鼠對(duì)照組的體重相比,食
12、用巴馬汀(100mg/Kg)的雌性大鼠在50天后體重明顯增加(P<0.05);在60-90天內(nèi),食用巴馬汀的雌性大鼠的體重顯著增加(P<0.01)。與空白雄性大鼠對(duì)照組的體重相比,食用巴馬汀(100mg/Kg)的雄性大鼠體重在40-70天內(nèi)明顯減少(P<0.05),而80-90天大鼠體重顯著降低(P<0.01)。所以,巴馬汀在大鼠體重有性別選擇的調(diào)節(jié)作用。通過檢查血液學(xué)的參數(shù),雌激素水平和分析腎組織中UCP2表達(dá)(免疫印跡法)的方法來驗(yàn)
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