硫氧還蛋白在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜動(dòng)態(tài)表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是糖尿病嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一，目前認(rèn)為氧化應(yīng)激是DR發(fā)病機(jī)制中的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。硫氧還蛋白系統(tǒng)(thioredoxin system)是一個(gè)氧化還原敏感的多功能小分子蛋白系統(tǒng)，其既有強(qiáng)大的抗自由基功能，又有促生長(zhǎng)和抑制凋亡的作用。因此，硫氧還蛋白系統(tǒng)可能成為氧化應(yīng)激相關(guān)疾病的治療新策略。糖尿病時(shí)糖脂代謝異常，DR發(fā)生發(fā)展過(guò)程中伴有大量自由基的生成，推測(cè)Trx作為重要的抗氧化蛋白，可能也參與了細(xì)胞損傷和凋亡的

2、發(fā)生。通過(guò)構(gòu)建糖尿病動(dòng)物模型，觀察Trx在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中的表達(dá)部位及動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，探討Trx與DR發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。
　　 方法:健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠90只，隨機(jī)分為兩組，糖尿病組(DM)按60mg/kg劑量，一次性左下腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素(STZ)造成大鼠糖尿病模型；對(duì)照組(NC)注射同等劑量的檸檬酸緩沖液。建模成功后，分別于4周、8周、12周各處死糖尿病組及正常對(duì)照組大鼠15只，采用HE染色法觀

3、察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)改變，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Trx在各組鼠視網(wǎng)膜內(nèi)的定位表達(dá)，采用Real-time PCR測(cè)定視網(wǎng)膜Trx mRNA表達(dá)。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以(-χ)±s表示。各組數(shù)據(jù)資料的方差齊性檢驗(yàn)采用Levene分析，檢驗(yàn)結(jié)果方差不齊。組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，各組間多重比較采用Nemenyi檢驗(yàn)，P＜0.05時(shí)認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　

4、1、糖尿病組大鼠呈現(xiàn)明顯多尿、多飲、多食，明顯消瘦、弓背，精神逐漸萎靡，毛皮污穢無(wú)光澤，早期多動(dòng)，后期反應(yīng)遲鈍，血糖波動(dòng)在較高水平(＞16.7mmol/L)。
　　 2、視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)觀察，糖尿病4周組與正常組相比較無(wú)明顯改變；糖尿病8周組視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)外核層細(xì)胞排列紊亂；糖尿病12周組可見(jiàn)視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)核層水腫，細(xì)胞排列紊亂。
　　 3、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，正常組與糖尿病組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)

5、核層有Trx陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)位于細(xì)胞漿。
　　 4、Real-time PCR結(jié)果顯示正常大鼠視網(wǎng)膜有Trx mRNA的表達(dá)，NC4wk、NC8wk、NC12wk各組間多重比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在各時(shí)間點(diǎn)(4wk、8wk、12wk)，DM組與NC組相比視網(wǎng)膜組織Trx mRNA表達(dá)下降。DM組大鼠視網(wǎng)膜組織Trx mRNA表達(dá)在第4周下降，第8周、第12周逐漸升高，至第12周時(shí)仍未達(dá)到正常水平，第4周與第12周相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義