三對苯丙素類同分異構(gòu)體對HepG2細胞系代謝同工酶CYP3A4、1A1酶表達的研究.pdf

1、目的：化合物結(jié)構(gòu)是決定藥效發(fā)揮的最本質(zhì)基礎(chǔ)，本實驗選取三對苯丙素類同分異構(gòu)體補骨脂素、異補骨脂素、歐前胡素、異歐前胡素、阿魏酸和異阿魏酸，討論其結(jié)構(gòu)變化對HepG2細胞系藥物代謝同工酶CYP3A4、1A1調(diào)控的影響，并闡述其相關(guān)機制，從而為臨床中草藥的安全合理使用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.采用MTT比色法測定六種藥物作用48h后對體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細胞增殖的影響，計算IC50，篩選有效濃度。
　　2.采

2、用流式細胞術(shù)測定六種藥物對HepG2細胞周期的影響。
　　3.通過實時熒光定量PCR技術(shù)測定經(jīng)六種藥物處理細胞后HepG2的CYP3A4和CYP1A1的mRNA的表達變化。
　　4.用免疫熒光法（IF）和蛋白免疫印跡法（WB）定位及定量測定六種藥物對HepG2中細胞CYP3A4蛋白酶表達的影響。
　　結(jié)果：
　　1.給藥48h，六種藥物在七個濃度（6.25~200μg/mL）作用下對HepG2細胞系增殖均有抑制作

3、用，并有明顯的劑量依賴關(guān)系。補骨脂素、異補骨脂素、阿魏酸和異阿魏酸均抑制細胞增殖于G2-M期，而歐前胡素和異歐前胡素阻止細胞增殖于G2-M期和S期。
　　2.六種藥物均是CYP3A4 mRNA的抑制劑。異補骨脂素的抑制作用比補骨脂素更強；歐前胡素在高中低三個濃度時均為CYP3A4 mRNA的弱抑制劑，異歐前胡素的抑制能力明顯強于歐前胡素；異阿魏酸對CYP3A4 mRNA的抑制作用略強于阿魏酸。
　　3.六種藥物均是CYP1A

4、1 mRNA的抑制劑。補骨脂素對CYP1A1 mRNA的抑制略比異補骨脂素強；異歐前胡素在低濃度時（25、50μg/mL）對1A1 mRNA的抑制作用明顯強于歐前胡素，而在高濃度時（100μg/mL）兩藥作用程度無太大區(qū)別；異阿魏酸在高中低三個濃度時對1A1 mRNA的抑制作用明顯強于阿魏酸。
　　4.IF和Western Blot實驗證實CYP3A4蛋白主要存在于細胞漿中，六種藥物作用后的CYP3A4蛋白表達明顯降低。
　

5、　結(jié)論:
　　1.六種藥物均為CYP3A4和CYP1A1酶的抑制劑，在臨床藥物合用時應(yīng)注意因藥物積蓄毒性而造成的不良反應(yīng)。
　　2.六種藥物均阻止了細胞mRNA和蛋白質(zhì)的合成進而抑制腫瘤細胞HepG2增殖，且歐前胡素和異歐前胡素同時減弱了DNA的合成從而抑制細胞生長。
　　3.補骨脂素、異補骨脂素、歐前胡素和異歐前胡素此四者同屬呋喃香豆素類化合物，發(fā)現(xiàn)呋喃環(huán)結(jié)構(gòu)變化是導(dǎo)致此四者對CYP3A4和CYP1A1的mRNA和蛋