REM睡眠剝奪對(duì)大鼠空間記憶、海馬CaN的影響及FK506的干預(yù)作用研究.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、[目的]觀察不同時(shí)間REM睡眠剝奪與恢復(fù)對(duì)大鼠空間記憶、海馬內(nèi)鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)活性及表達(dá)量的影響。探討REM睡眠剝奪導(dǎo)致的大鼠認(rèn)知功能障礙與海馬CaN的活性及表達(dá)之間的聯(lián)系以及睡眠恢復(fù)對(duì)認(rèn)知功能的改善作用。 [方法]成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(CC)、環(huán)境對(duì)照組(TC)、REM睡眠剝奪組(SD)及REM睡眠剝奪后睡眠恢復(fù)組(SR),每組分為1天、3天、5天組,其中REM睡眠剝奪組分為剝奪1天組(SD1)、3天組(

2、SD3)、5天組(SD5),睡眠恢復(fù)組分為剝奪1天后睡眠恢復(fù)6小時(shí)組(SR1)、剝奪3天后睡眠恢復(fù)18小時(shí)組(SR3)、剝奪5天后睡眠恢復(fù)30小時(shí)組(SR5)。選用Morris水迷宮對(duì)所有大鼠進(jìn)行空間認(rèn)知功能的訓(xùn)練(定位航行實(shí)驗(yàn)),訓(xùn)練完成后采用改良多平臺(tái)水環(huán)境睡眠剝奪法(MMPM)建立大鼠的REM睡眠剝奪模型,完成相應(yīng)時(shí)間的REM睡眠剝奪及睡眠恢復(fù)后,利用Morris水迷宮的空間搜索實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠的空間記憶。運(yùn)用比色法酶活性測(cè)定、蛋白質(zhì)

3、免疫印跡技術(shù)(Western-blot)測(cè)定大鼠海馬CaN酶活性及表達(dá)量的變化。 [結(jié)果]1.各組大鼠空間認(rèn)知功能訓(xùn)練的潛伏期及游泳距離無明顯差異(p>0.05);2.空間搜索實(shí)驗(yàn)指標(biāo)(空間記憶):CC與TC無明顯差異(p>0.05),CC1、TC1、SD1、SR1之間無明顯差異(p>0.05),SD3、SD5較CC、TC明顯降低(p<0.01),SR3較CC3、TC3、SD3無明顯差異(p>0.05),SR5較CC5(p<0.

4、01)、TC5(p<0.05)明顯降低,而與SD5無明顯差異(p>0.05),SD1較SD3(p<0.05)、SD5(p<0.01)明顯升高;3.海馬CaN酶活性:CC與TC無明顯差異(p>0.05),CC1、TC1、SD1、SR1之間無明顯差異(p>0.05),SD3較CC3、TC3、SR3明顯升高(p<0.01),SR3較CC3、TC3無明顯差異(p>0.05),SD5、SR5較CC5、TC5明顯升高(p<0.01),而兩者間無明顯

5、差異(p>0.05),SD3、SD5較SD1明顯升高(p<0.01);4.海馬CaN含量:各組間無明顯差異(p>0.05)。 第二部分 REM睡眠剝奪對(duì)大鼠空間記憶、海馬CaN的影響及FK06的干預(yù)作用 [目的]觀察不同時(shí)間REM睡眠剝奪過程中使用CaN抑制劑FKS06干預(yù),大鼠空間記憶、海馬CaN活性及表達(dá)量的變化。探討CaN在REM睡眠剝奪導(dǎo)致大鼠認(rèn)知功能障礙中的作用,以及FK506干預(yù)作用的機(jī)制。 [方法]

6、成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(CC)、環(huán)境對(duì)照組(TC)、REM睡眠剝奪組(SD)、REM睡眠剝奪后睡眠恢復(fù)組(SR)、REM睡眠剝奪FK506大劑量干預(yù)組(10mg/kg,F(xiàn)H)、小劑量干預(yù)組(1mg/kg,F(xiàn)L)、溶劑對(duì)照組(SV)、雷帕霉素對(duì)照組(2mg/kg,RA),每組分為1天、3天、5天組,其中1天的正常組又分為正常對(duì)照組(CC)、FK506大劑量組(10mg/kg,CFH)、FK506小劑量組(1mg/kg,CFL)

7、、溶劑對(duì)照組(CV),REM睡眠剝奪組分為剝奪1天組(SD1)、3天組(SD3)、5天組(SD5),睡眠恢復(fù)組分為剝奪1天后睡眠恢復(fù)6小時(shí)組(SR1)、剝奪3天后睡眠恢復(fù)18小時(shí)組(SR3)、剝奪5天后睡眠恢復(fù)30小時(shí)組(SR5)。選用Morris水迷宮對(duì)所有大鼠進(jìn)行空間認(rèn)知功能的訓(xùn)練(定位航行實(shí)驗(yàn)),訓(xùn)練完成后采用改良多平臺(tái)水環(huán)境睡眠剝奪法(MMPM)建立大鼠的REM睡眠剝奪模型,同時(shí)給予相應(yīng)的干預(yù)藥物或溶劑,完成相應(yīng)時(shí)間的REM睡眠

8、剝奪及睡眠恢復(fù)后,利用Morris水迷宮的空間搜索實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠的空間記憶。運(yùn)用比色法酶活性測(cè)定、蛋白質(zhì)免疫印跡(Western-blot)等方法測(cè)定大鼠海馬CaN酶活性及含量的變化。 [結(jié)果]1.各組大鼠空間認(rèn)知功能訓(xùn)練的潛伏期及游泳距離無明顯差異(p>0.05);2.CC、CFH、CFL、CV組的空間記憶及海馬CaN活性、含量無明顯差異(p>0.05);3.空間搜索實(shí)驗(yàn)指標(biāo)(空間記憶):CC與TC無明顯差異(p>0.05),1

9、天的各組之間無明顯差異(p>0.05);CC3、TC3、FH3、FL3、SR3之間無明顯差異(p>0.05),SR3、SD3、SV3、RA3之間無明顯差異(p>0.05),SD3、SV3、RA3較CC3、TC3(p<0.01)及FH3(p<0.05)明顯降低,F(xiàn)L3較SD3、SV3明顯升高(p<0.05),而較RA3無明顯差異(p>0.05):CC5、TC5、FH5之間無明顯差異(p>0.05),SD5、SR5、FL5、SV5、RA5之

10、間無明顯差異(p>0.05),SD5、SV5、RA5較CC5、TC5(p<0.01)及FH5(p<0.05)明顯降低,SR5、FL5較CC5(p<0.01)、TC5(p<0.05)明顯降低,而較FH5無明顯差異(p>0.05);4.海馬CaN酶活性:CC與TC無明顯差異(p>0.05),1天的各組之間無明顯差異(p>0.05);CC3、TC3、FL3、SR3之間無明顯差異(p>0.05),SD3、SV3、RA3較CC3、TC3、FH3、

11、FL3、SR3明顯升高(p<0.01),而三組間無明顯差異(p>0.05),F(xiàn)H3較SR3明顯降低(p<0.01),而較FL3無明顯差異(p>0.05);CC5、TC5、FH5之間無明顯差異(p>0.05),SD5、SV5、RA5、SR5、FL5較CC5、TC5明顯升高(p<0.01),而五組之間無明顯差異(p>0.05),F(xiàn)H5較SD5、SV5(p<0.01)及RA5、SR5(p<0.05)明顯降低,而較FL5無明顯差異(p>0.05

12、);5.海馬CaN含量:各組間無明顯差異(p>0.05)。 [結(jié)論]FK506對(duì)正常及REM睡眠剝奪1天的大鼠認(rèn)知功能及海馬CaN無明顯影響。隨著REM睡眠剝奪時(shí)間的延長(zhǎng),F(xiàn)K506干預(yù)能改善大鼠空間記憶,降低海馬CaN活性,而海馬CaN含量無明顯變化,REM睡眠剝奪3天時(shí)兩種劑量FK506干預(yù)均有效,REM睡眠剝奪5天時(shí)僅大劑量FK506干預(yù)有效。FK506可能通過降低海馬內(nèi)CaN活性改善REM睡眠剝奪大鼠的空間記憶。

13、 第三部分 REM睡眠剝奪與恢復(fù)對(duì)大鼠海馬STEP、ERK的影響及FK506的干預(yù)作用 [目的]觀察不同時(shí)間REM睡眠剝奪與恢復(fù)對(duì)大鼠海馬STEP(striatal enrichedprotein tyrosine phosphatase)及細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)含量、活性的影響,REM睡眠剝奪過程中使用CaN抑制劑FK506干預(yù)后的相應(yīng)變化。探討REM睡眠剝奪后海馬CaN活性升高導(dǎo)致大鼠認(rèn)知功能障礙的機(jī)制,以及FK506

14、的干預(yù)機(jī)制。 [方法]成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(CC)、環(huán)境對(duì)照組(TC)、REM睡眠剝奪組(SD)、REM睡眠剝奪后睡眠恢復(fù)組(SR)、REM睡眠剝奪FK506干預(yù)組(10mg/kg,F(xiàn)H)、溶劑對(duì)照組(SV)、雷帕霉素對(duì)照組(2mg/kg,RA),每組分為3天、5天組,其中REM睡眠剝奪組分為剝奪3天組(SD3)、5天組(SD5),睡眠恢復(fù)組分為剝奪3天后睡眠恢復(fù)18小時(shí)組(SR3)、剝奪5天后睡眠恢復(fù)30小時(shí)組(

15、SR5)。采用改良多平臺(tái)水環(huán)境睡眠剝奪法(MMPM)建立大鼠的REM睡眠剝奪模型,同時(shí)給予相應(yīng)的干預(yù)藥物或溶劑,完成REM睡眠剝奪及睡眠恢復(fù)后,運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)(Western-blot)測(cè)定觀察大鼠海馬STEP、ERK含量及活性狀態(tài)的變化。 [結(jié)果]1.海馬STEP磷酸化水平:CC、TC、FH間無明顯差異(p>0.05),SD3、SV3、RA3較CC3、TC3、SR3、FH3明顯降低(p<0.01),三組間無明顯差異(p

16、>0.05),SR3較CC3(p<0.01)、FH3(p<0.05)明顯降低,而較TC3無明顯差異(p>0.05);SD5、SV5、RA5、SR5較CC5、Tc5、FH5明顯降低(p<0.01),而四組之間無明顯差異(p>0.05);2.各組海馬ERK2總含量無明顯差異(p>0.05);3.海馬ERK2磷酸化水平:CC、TC、FH無明顯差異(p>0.05),SD、SV、RA無明顯差異(p>0.05),均較CC、TC、FH明顯降低(p<0

17、.01);SR3較SD3、SV3、RA3明顯升高(p<0.01),而與FH3無明顯差異(p>0.05);SR5較SD5、SV5(p<0.01)、RA5(p<0.05)明顯升高,而較CC5、TC5(p<0.01)、FH5(p<0.05)明顯降低。 [結(jié)論]REM睡眠剝奪能導(dǎo)致大鼠海馬內(nèi)STEP磷酸化水平下降即活性升高,伴有ERK2磷酸化水平下降即活性下降,對(duì)ERK2總量無明顯影響,而FK506干預(yù)能降低海馬STEP活性,同時(shí)升高海

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