人參皂苷Rh2及其新型衍生物誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡的分子調(diào)控機(jī)制.pdf

1、人參皂苷G-Rh2系人參中提取的達(dá)瑪烷二醇型皂苷，為人參中具有顯著抗癌藥理活性的皂苷成分。許多研究證實，G-Rh2具有廣譜抗腫瘤的藥理活性，但其抗腫瘤作用信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機(jī)理仍不甚清楚。
　　 本課題組前期研究，以腫瘤細(xì)胞分化與凋亡誘導(dǎo)劑篩選的理想模型——人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞為模型，運用高通量cDNA微陣列、寡核苷酸芯片等技術(shù)，率先鑒定到20(S)-G-Rh2抑瘤關(guān)鍵蛋白——腫瘤壞死因子α(tumor necrosisfac

2、tor alpha,TNFα)，并證實其在介導(dǎo)G-Rh2誘導(dǎo)凋亡表型中起決定作用。基于G-Rh2具有弱的植物雌激素活性，能與雌激素受體相互作用。本研究應(yīng)用Westemblotting和microRNA芯片等技術(shù)，進(jìn)一步揭示了雌激素受體在介導(dǎo)G-Rh2及其新型衍生物激活TNFα誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡中的作用。初步探討了G-Rh2對乳腺癌MCF-7細(xì)胞microRNA表達(dá)譜改變的影響。
　　 結(jié)果顯示：
　　 (1)G

3、-Rh2(0、35、40和45μM)呈濃度依賴性下調(diào)MCF-7細(xì)胞ERα表達(dá)，上調(diào)ERβ的表達(dá)，進(jìn)而上調(diào)TNFα的表達(dá)。ERα拮抗劑(1μM ICI182,780)和ERβ拮抗劑(10μMPHTPP)聯(lián)用，TNFα對G-Rh2作用不應(yīng)答，即能明顯阻斷G-Rh2激活TNFα的表達(dá)。ICI182，780與G-Rh2能協(xié)同拮抗ERα表達(dá)，但I(xiàn)CI182，780對ERβ表達(dá)無影響。此外，G-Rh2能呈濃度和時間依賴性誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡。

4、r>　　 (2)45μM G-Rh2作用乳腺癌MCF-7細(xì)胞48h后，123個microRNAs差異表達(dá)明顯。其中40個microRNAs差異表達(dá)上調(diào)，其中hsa-miR-29b作用的靶基因涉及雌激素受體ERα；83個microRNAs差異表達(dá)下調(diào)，其中hsa-miR-33b調(diào)控的靶包括TNFα受體、TNFα誘導(dǎo)蛋白6。
　　 (3)新型20(S)-G-Rh2衍生物：20(S)-原人參二醇-12β-2′-N，N-二甲基乙酸酯(

5、0、10、15和20μM))呈濃度依賴性下調(diào)乳腺癌MCF-7細(xì)胞ERα表達(dá)，上調(diào)ERβ的表達(dá)，進(jìn)而上調(diào)TNFα的表達(dá)，與20(S)-G-Rh2抗腫瘤作用調(diào)控ERα/ERβ-TNFα信號通路一致。其抑瘤活性(IC50＝17.48μM)比G-Rh2(IC50＝45μM)更強(qiáng)。
　　 本研究結(jié)果表明，ERα和/或ERβ主要介導(dǎo)了G-Rh2激活TNFα表達(dá)并誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡；差異表達(dá)hsa-miR-29b和hsa-miR-3