Robo蛋白在膀胱癌表達的檢測及沉默Robo基因對腫瘤細胞影響的研究.pdf

1、目的：
　　為進一步研究Robo信號蛋白在膀胱癌病理發(fā)生中的作用并探討治療的方法。擬在體外培養(yǎng)人膀胱移行上皮癌T24細胞，并檢測Robo蛋白在人膀胱癌移行上皮細胞T24中的表達。若該蛋白在T24細胞中表達，擬用RNA干擾技術沉默該基因并觀察腫瘤細胞的生長情況。嘗試探索膀胱癌的病理機制及實驗性的治療方法。
　　方法：
　　1、體外培養(yǎng)人膀胱移行上皮癌T24細胞，并用免疫組織化學染色法檢測是否有Robo蛋白的表達。如果有表

2、達，表達何種亞型？
　　2、用免疫熒光和蛋白質印跡法進一步證實免疫組織化學的結果
　　3、利用RNA干擾技術，尋找表達基因的沉默位點，構建合理的表達載體，轉染膀胱移行上皮癌T24細胞，免疫熒光化學觀察細胞轉染結果，western blot來檢測該表達基因沉默后蛋白表達的變化。
　　4、MTT法檢測該表達基因沉默后細胞的存活率的變化。
　　結果：
　　1、免疫組化和免疫熒光檢測顯示在體外培養(yǎng)的人膀胱移行上皮癌

3、細胞T24中有Robo陽性細胞檢出。分類抗體染色顯示表達亞型為Robo1和Robo4，而正常膀胱移行上皮細胞中無表達。
　　2、Western blot檢測顯示在人膀胱移行上皮癌細胞T24中有Robo1和Robo4蛋白表達。
　　3、采用RNA干擾技術能有效沉默T24中Robo1和Robo4的表達，尤其是Robo1的表達幾乎受到全部抑制（P＜0.01）。
　　4、MTT法檢測顯示Robo1干擾組細胞的存活率明顯下降，與