Robo蛋白在膀胱癌表達(dá)的檢測及沉默Robo基因?qū)δ[瘤細(xì)胞影響的研究.pdf

1、目的：
　　為進一步研究Robo信號蛋白在膀胱癌病理發(fā)生中的作用并探討治療的方法。擬在體外培養(yǎng)人膀胱移行上皮癌T24細(xì)胞，并檢測Robo蛋白在人膀胱癌移行上皮細(xì)胞T24中的表達(dá)。若該蛋白在T24細(xì)胞中表達(dá)，擬用RNA干擾技術(shù)沉默該基因并觀察腫瘤細(xì)胞的生長情況。嘗試探索膀胱癌的病理機制及實驗性的治療方法。
　　方法：
　　1、體外培養(yǎng)人膀胱移行上皮癌T24細(xì)胞，并用免疫組織化學(xué)染色法檢測是否有Robo蛋白的表達(dá)。如果有表

2、達(dá)，表達(dá)何種亞型？
　　2、用免疫熒光和蛋白質(zhì)印跡法進一步證實免疫組織化學(xué)的結(jié)果
　　3、利用RNA干擾技術(shù)，尋找表達(dá)基因的沉默位點，構(gòu)建合理的表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染膀胱移行上皮癌T24細(xì)胞，免疫熒光化學(xué)觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果，western blot來檢測該表達(dá)基因沉默后蛋白表達(dá)的變化。
　　4、MTT法檢測該表達(dá)基因沉默后細(xì)胞的存活率的變化。
　　結(jié)果：
　　1、免疫組化和免疫熒光檢測顯示在體外培養(yǎng)的人膀胱移行上皮癌

3、細(xì)胞T24中有Robo陽性細(xì)胞檢出。分類抗體染色顯示表達(dá)亞型為Robo1和Robo4，而正常膀胱移行上皮細(xì)胞中無表達(dá)。
　　2、Western blot檢測顯示在人膀胱移行上皮癌細(xì)胞T24中有Robo1和Robo4蛋白表達(dá)。
　　3、采用RNA干擾技術(shù)能有效沉默T24中Robo1和Robo4的表達(dá)，尤其是Robo1的表達(dá)幾乎受到全部抑制（P＜0.01）。
　　4、MTT法檢測顯示Robo1干擾組細(xì)胞的存活率明顯下降，與