siRNA靶向沉默HPA基因對人膀胱癌BIU-87細胞的生物學及HPA相關基因的影響.pdf

1、第一部分siRNA 靶向沉默HPA基因對人膀胱癌BIU-87細胞的生物學及HPA 相關基因的影響
　　 實驗一HPA-siRNA 序列設計合成和其對膀胱癌BIU-87細胞靶基因的沉默效應檢測
　　 目的：設計合成針對人肝素酶基因(HPA)的小干擾RNA(siRNA)序列，并檢測其對人膀胱癌BIU-87細胞靶基因的沉默效應。
　　 方法：針對人肝素酶基因mRNA 序列件設計并化學方法合成4 對肝素酶siRNA 及1

2、 對陰性對照序列,采用脂質(zhì)體2000 將其轉染人膀胱癌BIU-87細胞，RT-PCR、Real-time q-PC 檢測細胞HPAmRNA，Western blot 檢測細胞HPA 蛋白表達，并篩選出最有效的siRNA 序列。
　　 結果：四對siRNA 均能不同程度沉默HPA基因的表達，以針對1496-1514bp靶點的HPA-siH4 干擾效果最好，PCR和Western blot 結果示能有效降低BIU-87細胞HPA m

3、RNA和蛋白的表達水平。
　　 結論：成功設計和合成了沉默人肝素酶基因的小干擾RNA 序列，有效地降低了BIU-87細胞mRNA和蛋白的表達，為進一步研究奠定了基礎。
　　 實驗二siRNA 靶向沉默HPA基因后對VEGF、MMP-9基因和人膀胱癌BIU-87細胞生物學的影響
　　 目的：觀察小干擾RNA沉默HPA基因對人膀胱癌BIU-87細胞生物學及基因血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-

4、9)表達的影響。
　　 方法：用脂質(zhì)體2000 將前期研究篩選的HPA-siH4 轉染至人膀胱癌BIU-87細胞株內(nèi)，PCR、蛋白免疫印跡法分別檢測HPA 兩種相關基因VEGF、MMP-9mRNA和蛋白的表達水平；細胞克隆形成實驗，Transwell，小管形成實驗分別檢測干擾后BIU-87細胞增殖、侵襲、腫瘤血管生成能力。
　　 結果：HPA-siH4沉默靶基因后能有效降低BIU-87細胞VEGF和MMP-9兩種基因mR

5、NA和蛋白的表達水平；與對照組對比，干擾后BIU-87細胞增殖能力、侵襲能力和成血管作用均有下降。
　　 結論：靶向HPA的siRNA 有效沉默人膀胱癌BIU-87細胞HPA基因，并下調(diào)了與腫瘤進展密切相關的VEGF和MMP-9，能明顯抑制BIU-87細胞惡性生物學行為。
　　 第二部分腹腔鏡隱睪下降固定術與開放隱睪下降固術治療NPT療效的meta分析
　　 目的：采用Meta分析的方法來研究對比腹腔鏡下隱睪下降

6、固定術和傳統(tǒng)開放手術治療NPT的臨床效果，為臨床治療NPT 術式的選擇提供依據(jù)。
　　 方法：從Medline、Embase、Ovid、Web of Science以及Cochrane 數(shù)據(jù)庫檢索2010年8月以前的腹腔鏡下隱睪下降固定術(LO)與開放隱睪下降固定術(OO)進行隨機對照研究(RCTs)或臨床對照研究(OCSs)的相關文獻，并將其整理進行Meta分析。
　　 結果：在搜索到的226個相關文獻中，兩個隨機對照

7、研究及五個臨床對比研究文獻被納入，其中包括了173例行LO 術及261例行OO 術的病例。結果顯示，行LO 術的病例住院時間與行OO 術的病例相比顯著縮短（加權均數(shù)差(WMD)=-0.66；95％CI=-0.95～-0.37）。然而兩者在手術時間（WMD=4.02;95％ CI=-9.89～17.93; P=0.57）、術后恢復進食(WMD=-2.29; 95％ CI=-6.78～2.20;P=0.32)或術后恢復完全活動時間(WMD=

8、-9.71; 95％ CI=-27.84～8.42; P=0.29)、復發(fā)率(優(yōu)勢比(OR)=0.60; 95％ 可信區(qū)間(CI)=0.13～2.72; P=0.51)、睪丸存活率(OR=1.61; 95％ CI=0.30～8.52; P=0.58)、手術成功率(OR=1.41; 95％ CI=0.44～4.46;P=0.56)、睪丸萎縮(OR=1.70; 95％ CI=0.49～5.98; P=0.40).無明顯統(tǒng)計學差異。