siRNA靶向沉默HPA基因?qū)θ税螂装〣IU-87細(xì)胞的生物學(xué)及HPA相關(guān)基因的影響.pdf

1、第一部分siRNA 靶向沉默HPA基因?qū)θ税螂装〣IU-87細(xì)胞的生物學(xué)及HPA 相關(guān)基因的影響
　　 實(shí)驗(yàn)一HPA-siRNA 序列設(shè)計(jì)合成和其對(duì)膀胱癌BIU-87細(xì)胞靶基因的沉默效應(yīng)檢測(cè)
　　 目的：設(shè)計(jì)合成針對(duì)人肝素酶基因(HPA)的小干擾RNA(siRNA)序列，并檢測(cè)其對(duì)人膀胱癌BIU-87細(xì)胞靶基因的沉默效應(yīng)。
　　 方法：針對(duì)人肝素酶基因mRNA 序列件設(shè)計(jì)并化學(xué)方法合成4 對(duì)肝素酶siRNA 及1

2、 對(duì)陰性對(duì)照序列,采用脂質(zhì)體2000 將其轉(zhuǎn)染人膀胱癌BIU-87細(xì)胞，RT-PCR、Real-time q-PC 檢測(cè)細(xì)胞HPAmRNA，Western blot 檢測(cè)細(xì)胞HPA 蛋白表達(dá)，并篩選出最有效的siRNA 序列。
　　 結(jié)果：四對(duì)siRNA 均能不同程度沉默HPA基因的表達(dá)，以針對(duì)1496-1514bp靶點(diǎn)的HPA-siH4 干擾效果最好，PCR和Western blot 結(jié)果示能有效降低BIU-87細(xì)胞HPA m

3、RNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)論：成功設(shè)計(jì)和合成了沉默人肝素酶基因的小干擾RNA 序列，有效地降低了BIU-87細(xì)胞mRNA和蛋白的表達(dá)，為進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。
　　 實(shí)驗(yàn)二siRNA 靶向沉默HPA基因后對(duì)VEGF、MMP-9基因和人膀胱癌BIU-87細(xì)胞生物學(xué)的影響
　　 目的：觀察小干擾RNA沉默HPA基因?qū)θ税螂装〣IU-87細(xì)胞生物學(xué)及基因血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-

4、9)表達(dá)的影響。
　　 方法：用脂質(zhì)體2000 將前期研究篩選的HPA-siH4 轉(zhuǎn)染至人膀胱癌BIU-87細(xì)胞株內(nèi)，PCR、蛋白免疫印跡法分別檢測(cè)HPA 兩種相關(guān)基因VEGF、MMP-9mRNA和蛋白的表達(dá)水平；細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)，Transwell，小管形成實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)干擾后BIU-87細(xì)胞增殖、侵襲、腫瘤血管生成能力。
　　 結(jié)果：HPA-siH4沉默靶基因后能有效降低BIU-87細(xì)胞VEGF和MMP-9兩種基因mR

5、NA和蛋白的表達(dá)水平；與對(duì)照組對(duì)比，干擾后BIU-87細(xì)胞增殖能力、侵襲能力和成血管作用均有下降。
　　 結(jié)論：靶向HPA的siRNA 有效沉默人膀胱癌BIU-87細(xì)胞HPA基因，并下調(diào)了與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)的VEGF和MMP-9，能明顯抑制BIU-87細(xì)胞惡性生物學(xué)行為。
　　 第二部分腹腔鏡隱睪下降固定術(shù)與開放隱睪下降固術(shù)治療NPT療效的meta分析
　　 目的：采用Meta分析的方法來(lái)研究對(duì)比腹腔鏡下隱睪下降

6、固定術(shù)和傳統(tǒng)開放手術(shù)治療NPT的臨床效果，為臨床治療NPT 術(shù)式的選擇提供依據(jù)。
　　 方法：從Medline、Embase、Ovid、Web of Science以及Cochrane 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索2010年8月以前的腹腔鏡下隱睪下降固定術(shù)(LO)與開放隱睪下降固定術(shù)(OO)進(jìn)行隨機(jī)對(duì)照研究(RCTs)或臨床對(duì)照研究(OCSs)的相關(guān)文獻(xiàn)，并將其整理進(jìn)行Meta分析。
　　 結(jié)果：在搜索到的226個(gè)相關(guān)文獻(xiàn)中，兩個(gè)隨機(jī)對(duì)照

7、研究及五個(gè)臨床對(duì)比研究文獻(xiàn)被納入，其中包括了173例行LO 術(shù)及261例行OO 術(shù)的病例。結(jié)果顯示，行LO 術(shù)的病例住院時(shí)間與行OO 術(shù)的病例相比顯著縮短（加權(quán)均數(shù)差(WMD)=-0.66；95％CI=-0.95～-0.37）。然而兩者在手術(shù)時(shí)間（WMD=4.02;95％ CI=-9.89～17.93; P=0.57）、術(shù)后恢復(fù)進(jìn)食(WMD=-2.29; 95％ CI=-6.78～2.20;P=0.32)或術(shù)后恢復(fù)完全活動(dòng)時(shí)間(WMD=

8、-9.71; 95％ CI=-27.84～8.42; P=0.29)、復(fù)發(fā)率(優(yōu)勢(shì)比(OR)=0.60; 95％ 可信區(qū)間(CI)=0.13～2.72; P=0.51)、睪丸存活率(OR=1.61; 95％ CI=0.30～8.52; P=0.58)、手術(shù)成功率(OR=1.41; 95％ CI=0.44～4.46;P=0.56)、睪丸萎縮(OR=1.70; 95％ CI=0.49～5.98; P=0.40).無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。