非肌層浸潤性膀胱癌細(xì)胞系BIU-87導(dǎo)向肽的篩選.pdf

1、目的:利用噬菌體展示環(huán)七肽庫體外減性篩選，獲得能與人非肌層浸潤性膀胱癌細(xì)胞系BIU-87特異性結(jié)合的小分子肽，并初步鑒定其與BIU-87細(xì)胞結(jié)合的特異性。
　　 方法:以人非肌層浸潤性膀胱癌細(xì)胞系BIU-87為靶細(xì)胞，人正常膀胱粘膜上皮細(xì)胞為吸附細(xì)胞，對噬菌體展示環(huán)七肽庫進(jìn)行減性篩選。體外篩選3輪后，隨機(jī)挑取20個噬菌體克隆，以細(xì)胞ELISA法鑒定其與BIU-87細(xì)胞結(jié)合的特異性，排除假陽性或非特異性結(jié)合的噬菌體。提取能與BIU

2、-87細(xì)胞特異性結(jié)合的陽性噬菌體克隆的DNA，測序并翻譯后進(jìn)行氨基酸序列的同源性分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、經(jīng)3輪體外減性篩選后，可見噬菌體在人非肌層浸潤性膀胱癌細(xì)胞系BIU-87上出現(xiàn)明顯富集?；厥帐删w的滴度由第一輪的4.5×104增加到第三輪的1.8×107，增加了約400倍；同時回收率也顯著提高，由第一輪的2.25×l0-7增加至第三輪的9×10-5。
　　 2、以藍(lán)白篩選隨機(jī)挑取20個藍(lán)色噬菌體單克

3、隆，細(xì)胞ELISA鑒定顯示與BIU-87細(xì)胞的特異性結(jié)合系數(shù)大于2的克隆有11個，分別是Pl、P2、P5、P7、P8、Pll、P12、P14、P15、P17、P19，說明這11個噬菌缽克隆是與人非肌層浸潤性膀胱癌細(xì)胞系BIU-87特異性結(jié)合的陽性噬菌體克隆。
　　 3、將陽性噬菌體克隆進(jìn)行DNA測序并翻譯出相應(yīng)的氨基酸序列，顯示獲得4個小分子肽，其中小分子肽cQRENCSKc出現(xiàn)于噬菌體克隆P2、P7、P11、P14、P19中，