RNA干擾核糖核酸酶抑制因子表達(dá)對(duì)膀胱癌BIU-87細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、目的：構(gòu)建核糖核酸酶抑制因子（RI）基因siRNA干擾質(zhì)粒，并檢測(cè)其對(duì)人膀胱癌BIU-87細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響。 方法：設(shè)計(jì)并構(gòu)建針對(duì)RI基因mRNA的2個(gè)特異性siRNA表達(dá)載體和1個(gè)無(wú)同源性的陰性對(duì)照載體，通過(guò)酶切和DNA測(cè)序鑒定載體，再轉(zhuǎn)染BIU-87細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR、western blot和免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)干擾的有效性。觀察細(xì)胞形態(tài)改變，細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell法測(cè)定細(xì)胞粘附、遷移和侵襲能力的變

2、化，分析細(xì)胞中基質(zhì)金屬基質(zhì)酶的表達(dá)，及用激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：酶切和測(cè)序鑒定質(zhì)粒構(gòu)建符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)；轉(zhuǎn)入特異性siRNA表達(dá)載體后RI蛋白的表達(dá)被顯著抑制，對(duì)照組未發(fā)生顯著改變；2個(gè)干擾實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞形態(tài)堆疊嚴(yán)重，細(xì)胞粘附顯著降低，遷移和侵襲能力顯著增加，基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9顯著提高，細(xì)胞骨架微絲聚集，細(xì)胞伸展出片狀偽足。 結(jié)論：已成功構(gòu)建RI基因siRNA干擾質(zhì)粒，抑制RI基因的表達(dá)