人核糖核酸酶抑制因子對(duì)腫瘤細(xì)胞生長、凋亡、轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、大連醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文人核糖核酸酶抑制因子對(duì)腫瘤細(xì)胞生長、凋亡、轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制的研究姓名：陳俊霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：崔秀云20040601體瘤的生長中起重要作用，沒有新血管的形成，實(shí)體瘤長到卜2mm3時(shí)，腫瘤將會(huì)自行退化。這些結(jié)果提示RI可能起著候選抑癌基因的作用而可能與某些腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移有關(guān)。然而，目前除了RI的抗癌作用與其抑制血管生成的活性外，是否還具有其他抑癌功能以及RI抗癌的確切的分子機(jī)

2、制還不清楚。本研究的目的在于進(jìn)一步了解RI的潛在功能以及探討RI與腫瘤生長、浸潤、轉(zhuǎn)移的關(guān)系，以期闡明RI抗癌的分子機(jī)理。本實(shí)驗(yàn)研究甲基化抑制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞中核糖核酸酶抑制因子表達(dá)的影響；將人的核糖核酸酶抑制因子基因的cDNA通過逆轉(zhuǎn)錄包裝細(xì)胞PA317轉(zhuǎn)染到B16小鼠黑色瘤細(xì)胞中，觀察轉(zhuǎn)染的RI基因在體內(nèi)外對(duì)細(xì)胞生長、凋亡、以及浸潤、轉(zhuǎn)移特性的影響；以浸潤和非浸潤的膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞系為模型，觀察了RI的表達(dá)變化及其對(duì)腫瘤細(xì)胞浸潤、轉(zhuǎn)移

3、能力的影響。為此做了以下的一些工作：1用甲基化抑制劑5aza一2’deoxycytidine(5一Aza—CdR)作用人乳腺癌細(xì)胞系MCF一7，人胃癌細(xì)胞系BGC一823，人前列腺癌細(xì)胞系叫一145和人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT一29。通過RT—PCR，蛋白免疫印跡法(westernblotting)，免疫熒光(imaunofluorescence)和免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry)技術(shù)分析RI基因的表達(dá)。結(jié)果顯示5Aza—

4、CdR能顯著提高RI基因在人乳腺癌細(xì)胞系MCF一7，人胃癌細(xì)胞系BGc一823，人的前列腺癌細(xì)胞系叫一145的表達(dá)，但對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT一29沒有明顯的影響。結(jié)果表明，RI基因可能與胃癌，前列腺癌，和乳腺癌的發(fā)生有關(guān)。在人類腫瘤中，許多抑癌基因可通過啟動(dòng)予區(qū)域異常的甲基化使表達(dá)喪失，用甲基化抑制劑5Aza—CdR處理能恢復(fù)基因的表達(dá)，RI可能在某些組織中具有抑癌基因的功能。2將人的核糖核酸酶抑制因子基因的cDNA通過逆轉(zhuǎn)錄包裝細(xì)胞PA

5、317轉(zhuǎn)染到B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞中，用轉(zhuǎn)染空載體和未轉(zhuǎn)染的B16細(xì)胞作為對(duì)照。通過PCRRT—PCR，蛋白免疫印跡，免疫熒光分析鑒定，獲得穩(wěn)定表達(dá)人核糖核酸酶抑制因子的細(xì)胞株。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染的RI基因在體外能顯著地抑制細(xì)胞增殖，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和誘導(dǎo)凋亡以及引起細(xì)胞形態(tài)的改變，將三種B16細(xì)胞接種到C57BL／6小鼠中結(jié)果，轉(zhuǎn)染RI基因的實(shí)驗(yàn)組顯著地抑制的了腫瘤的生長，與兩個(gè)對(duì)照組相比，荷瘤小鼠有更長的存活時(shí)間，較長的腫瘤生長潛伏期，更低