逆轉錄病毒載體介導人核糖核酸酶抑制因子體內(nèi)抑制B16黑色素瘤生長.pdf

1、大連醫(yī)科大學碩士學位論文逆轉錄病毒載體介導人核糖核酸酶抑制因子體內(nèi)抑制B16黑色素瘤生長姓名：王艇申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：崔秀云20040601霉素篩選標記(neo)。該載體質粒一旦被轉染入包裝細胞系PA317[Ip可被其表達的逆轉錄病毒外殼蛋白所包裝，從而形成有感染力，卻復制缺陷型的逆轉錄病毒顆粒。目的：研究逆轉錄病毒載體pLNCX介導人核糖核酸酶抑制因子(hRI)的基因治療系統(tǒng)經(jīng)靜脈途徑能否實現(xiàn)在腫瘤實

2、驗動物模型小鼠體內(nèi)有效轉染、表達，從而通過抗血管生成產(chǎn)生抗腫瘤效應，本實驗還要檢測該系統(tǒng)對小鼠血液和骨髓的安全性。方法：經(jīng)包裝細胞系PA317體外包裝，攜帶hRI的cDNA序列的重組轉錄病毒載體經(jīng)與NaCI和聚乙二醇6000(PEGfi000)共沉淀并離心濃縮。再經(jīng)SepharoseCL一4B凝膠層析純化后，經(jīng)過在NIH／3T3成纖維細胞系上的病毒滴度測定，以空載體及PBS緩沖液等為對照，經(jīng)靜脈注射給皮下接種B16黑色素瘤的C57BL／

3、6J0鼠體內(nèi)，以病理及免疫組織化學檢測目的基因hRl在小鼠骨髓、肝臟和脾臟等體內(nèi)各臟器的表達水平，腫瘤血管生成，觀察hRI通過抗血管生成對黑色素瘤生長的抑制作用。以外周血細胞記數(shù)血液生化和骨髓染色體檢測評價病毒載體對機體造血系統(tǒng)的影響。結果：轉染的hRi基因產(chǎn)物在實驗動物體內(nèi)有效地表達，并對B16黑色素癟表現(xiàn)出了抗血管生成效應，能抑制黑色素瘤的生長，同時不伴有明顯的對遣血系統(tǒng)的影響，同時我們發(fā)現(xiàn)hRI在腫瘤纖維包膜中的成纖維細胞有高表達