野鳥(niǎo)源LPAIV、HPAIV對(duì)家鴨和野鴨的感染特性分析及AIV傳播方式的研究.pdf

1、野鳥(niǎo)尤其是以雁鴨類為主的水禽（鴨和鵝）是禽流感病毒(AIV)的天然宿主庫(kù)，幾乎所有亞型的AIV都已在世界范圍內(nèi)的野鳥(niǎo)尤其是野生水禽體內(nèi)分離出，而高致病性禽流感或低致病性禽流感的暴發(fā)一般也都來(lái)源于野鳥(niǎo)或水禽。H5N1亞型高致病性禽流感病毒(HPAIV)曾給世界養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)十分慘重的經(jīng)濟(jì)損失，一直受到公共衛(wèi)生等領(lǐng)域的密切關(guān)注，雖然低致病性禽流感病毒(LPAIV)致病性較低，但存在異常廣泛，大部分LPAIV能夠在水禽體內(nèi)長(zhǎng)期適應(yīng)卻不發(fā)病，在種群

2、內(nèi)或種群間長(zhǎng)期循環(huán)存在，易發(fā)生基因重組、變異、宿主易感性改變，甚至有轉(zhuǎn)變?yōu)镠PAIV的潛在危險(xiǎn)，因此由其帶來(lái)的損失亦不容忽視。水禽包括鴨是攜帶和傳播AIV的一個(gè)特殊而重要的群體，可長(zhǎng)時(shí)間的帶毒并向外界排毒，具有潛在感染其他宿主的危險(xiǎn)，而AIV對(duì)水禽的致病力也已經(jīng)發(fā)生明顯改變，因此研究AIV對(duì)水禽的致病性和病毒傳播方式以及水禽AIV傳播中的作用更加成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)。
　　為確定家鴨及野鴨在HPAIV和LPAIV傳播中所起的作用，明

3、確LPAIV和HPAIV的傳播方式，驗(yàn)證科學(xué)界對(duì)遷徙野鳥(niǎo)在H5N1AIV傳播機(jī)制探討中所作的“跳躍式和接力式”傳遞方式的假設(shè)，本研究選取兩株黑龍江省三江自然保護(hù)區(qū)野鳥(niǎo)源低致病性禽流感病毒，A/Garganey/SanJiang/160/2006(H5N2)（簡(jiǎn)稱H5N2 SJ160）和A/Mallard/SanJiang/162/2006(H6N2)(簡(jiǎn)稱H6N2 SJ162)分別以106EID50的劑量，通過(guò)自然孔（眼、咽、鼻、泄殖腔

4、）對(duì)幼齡（2周齡等）家鴨（SPF紹興麻鴨）及野鴨（綠頭鴨）進(jìn)行感染，觀察感染鴨臨床癥狀、病毒排出和復(fù)制、組織器官損傷、血清抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)情況，判斷病毒對(duì)鴨的感染和致病力，確定LPAIV傳播方式及鴨在LPAIV傳播中的作用。本研究還構(gòu)建了兩株LPAIV感染陽(yáng)性狀態(tài)下（血清抗體陽(yáng)性）的幼齡（5周齡）家鴨模型，進(jìn)行一株野鳥(niǎo)源高致病性禽流感病毒A/Bar Headed Goose/Qinghai/3/05(H5N1)(簡(jiǎn)稱H5N1BHG05)的感染試

5、驗(yàn)研究，感染劑量為105EID50，通過(guò)自然孔（眼、咽、鼻、泄殖腔）接種，觀察感染鴨臨床癥狀、病毒排出和復(fù)制、組織器官損傷、血清抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)情況，以確定野鳥(niǎo)攜帶或感染的低致病力毒株是否可以抵抗HPAIV對(duì)家鴨進(jìn)行感染，同時(shí)，分別以105EID50和106EID50進(jìn)行HPAIV A/BarHeaded Goose/Qinghai/3/05(H5N1)對(duì)幼齡（3周齡等）及亞成體（13周齡）家鴨和野鴨的感染性試驗(yàn)，觀察感染鴨臨床癥狀、病毒排出和

6、復(fù)制、組織器官損傷、血清抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)情況，判定病毒致病性，從而探討家鴨甚至野鴨在流感病毒傳播中的作用，正確定位家鴨及野鴨在AIV綜合防控中的角色。本研究可得出以下結(jié)論:
　　1.野鳥(niǎo)源LPAIV H5N2SJ160對(duì)1日齡、2周齡SPF幼齡家鴨（紹興麻鴨）和幼齡綠頭鴨均呈現(xiàn)低致病性，臨床癥狀輕微，無(wú)死亡。病毒易感性與幼齡鴨日齡和宿主的種類有關(guān)，2周齡的SPF家鴨和綠頭鴨比1日齡的鴨對(duì)病毒更敏感，SPF家鴨比綠頭鴨對(duì)病毒更敏感。

7、　　2.野鳥(niǎo)源LPAIV H5N2SJ160和H6N2SJ162對(duì)2周齡SPF幼齡家鴨（紹興麻鴨）均呈低致病性，臨床癥狀輕微，無(wú)死亡。試驗(yàn)鴨以泄殖腔排毒為主，排毒量較高，排毒時(shí)間較長(zhǎng)（最長(zhǎng)可達(dá)10dpi）。病毒僅能在盲腸扁桃體和法氏囊兩個(gè)器官組織中較高水平復(fù)制，僅對(duì)少數(shù)組織器官造成不同程度的病理組織損傷。
　　3.2周齡SPF幼齡家鴨對(duì)病毒H5N2SJ160和H6N2SJ162均敏感，染毒后既可排出病毒，又可進(jìn)行病毒水平傳播，提示

8、自然狀態(tài)下，特別是在高度集群密切接觸時(shí)，易于發(fā)生個(gè)體間病毒的傳播，在兩個(gè)亞型LPAIV傳播中可起到一定作用。病毒在2周齡SPF鴨消化道內(nèi)比呼吸道內(nèi)更能優(yōu)先復(fù)制，推斷該兩株病毒的傳播更符合口泄口傳播的方式。
　　4.2周齡SPF幼齡家鴨同亞型(H5N2)組和異亞型(H6N2)組的LPAIV超前免疫均可改變H5N1亞型HPAIV對(duì)鴨的感染，臨床癥狀、病毒排出與復(fù)制、病理組織損傷、血清抗體檢測(cè)情況各有不同，其中，同亞型(H5N2)組超前

9、免疫要優(yōu)于異亞型(H6N2)組，可更有效地抵抗H5N1亞型HPAIV的感染。異亞型(H6N2) LPAIV組感染家鴨排毒率更高，排毒量更大，更適合完成HPAIV的長(zhǎng)距離傳播，在HPAIV的傳播過(guò)程中具有更大的潛在危險(xiǎn)，本研究為國(guó)內(nèi)首次通過(guò)試驗(yàn)在一定程度上支持野鳥(niǎo)感染H5N1后相對(duì)于家禽感染會(huì)有更長(zhǎng)的潛伏期和病程的推測(cè)，也將進(jìn)一步支持科學(xué)界對(duì)遷徙野鳥(niǎo)在H5N1傳播機(jī)制探討中所作的“跳躍式和接力式”傳遞方式的假設(shè)。
　　5.野鳥(niǎo)源HP

10、AIV H5N1BHG05對(duì)不同周齡（幼齡和亞成體）的SPF家鴨和綠頭鴨致病性不同，病毒雖可在不同周齡、不同種類鴨體內(nèi)多個(gè)器官高水平復(fù)制，造成不同程度的病理?yè)p傷，但致病性與水禽年齡、宿主類型有關(guān)。相同日齡的SPF家鴨和野鴨（綠頭鴨）對(duì)HPAIVH5N1BHG05感染情況為SPF鴨比綠頭鴨更易感，幼齡家鴨比亞成體家鴨更易感，其中對(duì)3周齡SPF幼齡家鴨致病性最強(qiáng)，死亡率最高，可達(dá)100％;對(duì)13周齡亞成體綠頭鴨致病性相對(duì)最低。6周齡SPF幼

11、齡家鴨排毒最強(qiáng)（最高病毒滴定可達(dá)10203EID50/0.1mL），13周齡亞成體綠頭鴨排毒時(shí)間與13周齡亞成體SPF家鴨一致（最長(zhǎng)可達(dá)7天以上），但HPAIV傳播與LPAIV有所不同，雖具有直接接觸感染的能力，但個(gè)體間病毒傳播能力稍差。
　　6.1周齡和2周齡SPF幼齡家鴨對(duì)病毒H5N1BHG05并不敏感，不排出病毒，也不具有病毒傳播作用。3-6周齡SPF幼齡家鴨病毒感染后具有明顯的排毒現(xiàn)象(最高病毒滴定可達(dá)10203EID50

12、/0.1mL)，也可進(jìn)行病毒水平傳播（同居感染對(duì)照組鴨可自然感染病毒），推測(cè)在AIV病毒傳播中可起到一定作用。而13周齡亞成體鴨感染病毒后不明顯發(fā)病，但可微量的排出病毒(13周齡亞成體SPF家鴨可達(dá)1015EID50/0.1mL)，羽髓中亦有病毒存在(13周齡亞成體綠頭鴨可達(dá)10125EID50/0.1mL)，所以在HPAIV傳播的過(guò)程中意義可能同樣重大。
　　7.野鳥(niǎo)源HPAIV H5N1BHG05試驗(yàn)感染幼齡鴨及亞成體鴨后以呼