MicroRNA-34c調(diào)控C-Met在肝細(xì)胞肝癌中作用的研究.pdf

1、背景:
　　肝細(xì)胞癌是世界第六位高發(fā)的惡性腫瘤，94％的死亡率高居惡性腫瘤第三位，每年50萬患者死于肝細(xì)胞癌，其高發(fā)病率與死亡率嚴(yán)重威脅全人類的健康。肝細(xì)胞癌的發(fā)生與HBV及HCV的感染有重要關(guān)系，目前認(rèn)為，肝細(xì)胞癌的發(fā)病是一個多基因多階段的過程，相關(guān)癌基因激活與抑癌基因的失活在其發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用，但是肝細(xì)胞癌發(fā)病的分子機(jī)制尚未完全清楚，這也阻礙了肝細(xì)胞癌的診斷與治療，極大影響了肝細(xì)胞癌的預(yù)后。
　　MicroRNAs

2、是由21～25個核苷酸組成的非編碼小RNA，可以通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)從而發(fā)揮多種生物學(xué)功能。MicroRNAs在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中既可以抑制腫瘤的發(fā)展也可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。許多研究證實(shí)，microRNA-34c在多種腫瘤組織中表達(dá)降低，如非小細(xì)胞肺癌，乳腺癌，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，前列腺癌。以上研究提示，microRNA-34家族可能在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了抑癌基因的作用。最新研究發(fā)現(xiàn)，microRNA-34家族被認(rèn)為是P53的直

3、接調(diào)節(jié)靶點(diǎn)，上調(diào)microRNA-34可以導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯。microRNA-34c與肝細(xì)胞癌的發(fā)生與發(fā)展的關(guān)系有待于深入研究。
　　目的:
　　探究microRNA-34c及其靶基因c-Met在原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:
　　1.熒光定量PCR檢測10組臨床肝癌組織與癌旁組織中microRNA-34c的表達(dá)。
　　2.蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測10組臨床肝癌組織

4、與癌旁組織中c-Met蛋白的表達(dá)。
　　3.熒光定量PCR及Western blot分別檢測細(xì)胞系HepG2.2.15轉(zhuǎn)染microRNA-34c后c-MetmRNA及蛋白的表達(dá)。
　　4.Western blot檢測細(xì)胞系HepG2.2.15轉(zhuǎn)染microRNA-34c及c-Met干擾RNA后P53蛋白的表達(dá)。
　　5.裸鼠肝癌移植腫瘤模型的建立及瘤內(nèi)注射治療后腫瘤體積的測量。
　　結(jié)果:
　　1.肝癌組

5、織中microRNA-34c表達(dá)較癌旁組織明顯下降。10組臨床收集的肝癌組織與癌旁組織比較，9例肝癌組織中microRNA-34c表達(dá)量分別降低為為相應(yīng)癌旁組織的0.196～0.683倍，1例肝癌組織表達(dá)升高為1.137倍。
　　2.肝癌組織中c-Met表達(dá)較癌旁組織明顯上升。10組肝癌組織與癌旁組織比較，7例肝癌組織中c-Met蛋白表達(dá)升高。
　　3.Hepg2.2.15細(xì)胞系轉(zhuǎn)染microRNA-34c后c-Met表達(dá)下

6、降。與對照組比較，microRNA-34c轉(zhuǎn)染組c-Met在mRNA水平下降為0.356倍(P＜0.01)。Westernblot檢測c-Met蛋白水平表達(dá)量，結(jié)果與mRNA水平一致。
　　4.Hepg2.2.15細(xì)胞系轉(zhuǎn)染microRNA-34c，c-Met干擾RNA后P53表達(dá)升高(P＜0.05)。
　　5.microRNA-34c注射治療后腫瘤較對照組明顯減小(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　microR