過氧化物酶體增殖體激活受體γ激動劑對人子宮肌瘤影響的實驗研究及臨床觀察.pdf

1、全文分為三部分： 第一部分 PPAR-γ和TGF-β3在人體子宮肌瘤表達的意義以及體外分離培養(yǎng)的人子宮肌瘤細胞的生物學特性研究 目的：本研究對比了體外培養(yǎng)的人子宮肌瘤細胞和同源子宮肌瘤組織以及子宮正常平滑肌組織的ER、PR、PPAR-γ及TGF-β 3的表達，以期說明它們在子宮肌瘤發(fā)病機制中的意義，并驗證體外培養(yǎng)的子宮肌瘤細胞具有和人體內子宮肌瘤細胞相似的生物學特性。 方法：應用膠原酶消化法分離獲得子宮肌瘤細胞并

2、體外培養(yǎng)。通過免疫組化的方法鑒定培養(yǎng)的細胞為子宮肌瘤細胞。同時應用RT-PCR法和免疫熒光的方法分別檢測肌瘤組織、正常平滑肌組織和體外培養(yǎng)的子宮肌瘤細胞的ER、PR、PPAR-γ及TGF-β3的mRNA和蛋白的表達情況。 結果：應用膠原酶消化法可以獲得大量純度較高的子宮肌瘤細胞，RT-PCR檢測發(fā)現培養(yǎng)4代的子宮肌瘤細胞與子宮肌瘤組織的ER、PR、PPAR-γ和TGF-β3的mRAN的表達無明顯差異(P>0.05)，但是二者較子

3、宮正常平滑肌組織的表達均明顯增強(P<0.05)。免疫熒光檢測顯示體外培養(yǎng)的子宮肌瘤細胞與子宮肌瘤組織的ER、PR、PPAR-γ、TGF-β 3蛋白表達無明顯差異(P>0.05)，但是二者較子宮正常平滑肌組織的表達均明顯增強(P<0.05)。 結論：應用膠原酶消化法獲得的體外子宮肌瘤細胞具有和人體內子宮肌瘤細胞相似的生物學特性，此外ER、PR、PPAR-γ和TGF-β3在子宮肌瘤的發(fā)生機制中發(fā)揮重要作用。 第二部分 PP

4、AR-γ激動劑羅格列酮對體外培養(yǎng)的人子宮肌瘤細胞的生物學效應的研究 目的：觀察PPAR-γ特異性激動劑羅格列酮對體外培養(yǎng)的人子宮肌瘤細胞增殖、凋亡以及PPAR-γ、TGF-B3、Bcl-2和Bax表達的影響，明確羅格列酮對體外人子宮肌瘤細胞生長的作用。 方法：應用膠原酶消化法分離、獲得子宮肌瘤細胞，將體外培養(yǎng)的肌瘤細胞分為5組：不同羅格列酮濃度(10<'-7>mol/l，10<'-8>mol/l，10<'-9>mol/l

5、，10<'-10>mol/l)的4個實驗組和不加任何藥物的對照組。分別于加藥后36h和72h：應用MTT觀察各組細胞的增殖率；應用RT-PER檢測各組子宮肌瘤的PpAR-γ、TGF-β3、Bcl-2和Bax mRNA表達情況；應用免疫熒光法分析PPAR-γ、TGF-B3的蛋白表達情況；應用TUNEL法檢測各組肌瘤細胞凋亡情況。 結果：加藥36h，各組之間子宮肌瘤細胞的增殖率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。加藥72h，各實驗組子

6、宮肌瘤細胞的增殖率明顯降低，與相同藥物濃度實驗組作用36h的子宮肌瘤細胞增殖率相比較具有明顯的差異(P<0.05)。最大抑制作用發(fā)生在加藥72h的10<'-7>mol/l實驗組(P<0.05)：RT-PCR結果顯示：加藥36h，10<'-7>mol/l實驗組肌瘤細胞PPAR-γ mRNA的表達明顯提高，與其他相同作用時間的各組相比較有明顯差異(P<0.05)；其他各組在加藥36h后與對照組相比較PPAR-γ mRNA的表達無明顯差異(P

7、>0.05)。在加藥72h各實驗組肌瘤細胞的PPAR-γ mRNA表達伴隨藥物濃度的提高而增加，10<'-7>mol/l實驗組肌瘤細胞在加藥72h PPAR-γ mRNA表達提高最明顯(P<0.01)。羅格列酮作用36h對子宮肌瘤細胞TGF-B3 mRNA表達的影響不明顯(P>0.05)。不同濃度的羅格列酮在作用72h對各實驗組子宮肌瘤細胞的TGF～β3 mRNA表達水平有顯著的影響，伴隨藥物濃度的提高，肌瘤細胞的TGF—β3 mRNA

8、表達降低(P<0.05)，10<'-7>mol/l實驗組的肌瘤細胞在加藥72h TGF-β3 mRNA表達降低最明顯(P<0.01)。在羅格列酮作用36h， 10<'-7>mol/l實驗組與其他4組比較細胞Bcl-2 mRNA的表達明顯降低(P<0.05)，其余各組差異不明顯(P>0.05)。在羅格列酮作用72h時，各實驗組子宮肌瘤細胞的Bcl-2 mRNA表達明顯降低，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。在10<'-7>mol/l實驗組

9、在加藥72h時，Bcl-2 mRNA表達降低最明顯(P<0.01)。在羅格列酮作用36h，各實驗組Bax mRNA的表達改變不明顯(P>0.05)。羅格列酮作用72h時可以明顯提高肌瘤細胞Bax mRNA的表達，與其他3個實驗組相比較，10<'-7>mol/l實驗組Bax mRNA的表達上調最明顯(Pmo

10、l/l實驗組在加藥36h時肌瘤細胞PPAR-γ蛋白表達有所增加(P<0.05)，其他組別PPAR-γ蛋白表達增加不明顯(P>0.05)。各實驗組在加藥72h后，肌瘤細胞PPAR-Y的表達伴隨羅格列酮濃度的增加而明顯增加(P<0.05)。各實驗組TGF-β3蛋白表達在加藥36h時降低不明顯(P>0.05)。加藥72h，各實驗組肌瘤細胞的TGF-B3的表達伴隨藥物濃度的升高而降低，與相同藥物濃度實驗組加藥36h有明顯差異(P<0.05)。T

11、UNEL分析結果顯示，在加藥36h各實驗組肌瘤細胞的凋亡率有不同程度的增加，但是相互之間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。在加藥72h子宮肌瘤細胞的凋亡率增加明顯，10<'-7>mol/l實驗組與其他3個實驗組以及對照組相比較細胞凋亡率最高(P<0.01)。10<'-8>mol/l實驗組與10<'-9>mol/l和10<'-10>mol/l實驗組之間的細胞凋亡率也存在明顯差異(P<0.05)。以上羅格列酮的作用均存在在時間和濃度依賴性

12、。 結論：PPAR-γ激動劑羅格列酮可以抑制體外培養(yǎng)的人子宮肌瘤細胞的增殖和促進肌瘤細胞的凋亡，這種作用可能是通過調控PPAR-γ、TGF—β3、Bcl-2和Bax的表達來發(fā)揮作用的；羅格列酮有治療子宮肌瘤的潛能。 第三部分 羅格列酮對人體子宮肌瘤作用的臨床觀察 目的：觀察PPAR-γ激動劑羅格列酮對子宮肌瘤病人的血清雌孕激素水平、肌瘤體積的影響以及對人體子宮肌瘤細胞PPAR—γ、TGF-B3、Bc1-2、Bax

13、表達和細胞凋亡的影響，明確羅格列酮對于子宮肌瘤的治療作用，以期為子宮肌瘤的臨床用藥提供新的選擇。 方法：將納入的需要手術治療的子宮肌瘤病人分成治療組和對照組。治療組的子宮肌瘤病人手術前應用羅格列酮(商品名：文迪雅)治療一個月，對照組不給予任何處理。分別檢測治療組病人治療前后以及對照組病人術前的肝腎功能、空腹血糖、血清雌孕激素水平。B超檢測治療組病人治療前后的子宮肌瘤體積變化，應用RT—PCR分別檢測治療組和對照組肌瘤組織的的PP

14、AR-γ、TGF-B3、Bc1-2以及Bax mRNA表達情況；應用免疫熒光法分析治療組和對照組子宮肌瘤組織PPAR-γ、TGF-B3蛋白表達情況；應用TLJNEL法檢測治療組和對照組子宮肌瘤組織細胞凋亡情況。 結果：治療組病人治療前與對照組相比較，肝腎功能、空腹血糖、血清雌孕激素水平無明顯差異(P>0.05)。治療組病人治療前后肝腎功能、空腹血糖、血清雌孕激素水平無明顯差異(P>0.05)。B超檢測顯示治療組病人治療后肌瘤體積

15、較治療前減小，但是差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。RT-PCR分析顯示治療組肌瘤細胞PPAR—γ mRNA的表達較對照組高(p<0.05)；治療組肌瘤細胞TGF-B3mRNA的表達較對照組明顯降低(P<0.05)；治療組肌瘤細胞Bcl-2 mRNA的表達較對照組明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；治療組肌瘤細胞Bax mRNA的表達較對照組高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。TUNEL凋亡檢測顯示治療組肌瘤細胞的凋亡率較對照