紫檀芪對局灶性腦缺血的保護作用及對LOX-1、p-ERK1-2和NF-KB調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的:腦血管病是我國居民死亡的首要原因和造成成人殘疾的第一原因，其中以缺血性腦血管病最為常見[1-2]。繼發(fā)性腦損傷是導致腦梗死后病情加重的主要原因，主要包括細胞炎癥損傷、氧化應激損傷、Ca2+超載、細胞毒性損傷、及自由基損傷等，造成復雜的病理級聯(lián)反應，其中存在于腦梗死后壞死和缺血區(qū)域過度炎癥損傷和氧化應激損傷，是導致繼發(fā)損傷的主要原因[3]。已知腦缺血再灌注后腦組織內(nèi)活性氧(reactiveoxygenspeciesROS)產(chǎn)生增多，

2、而ROS可以誘導植物凝集素樣oxLDL受體-1(1ectin-likeoxLDLreceptor-1，LOX-1)表達增加[4]。LOX-1上調(diào)后，與其配體在內(nèi)皮細胞表面結(jié)合后又可以反過來引發(fā)細胞內(nèi)ROS的大量產(chǎn)生，進而下調(diào)NO的表達及NF-κB的活化，ROS又成為NF-κB的下游信號。因此，ox-LDL與其特異性受體LOX-1結(jié)合之后，可通過大量誘發(fā)ROS表達，激活下游的MAPK或AKT等蛋白激酶[5]，引起NF-κB、激活蛋白-1(

3、AP-1)和MCP-1等的活化及轉(zhuǎn)錄，進而調(diào)控氧化還原敏感基因的表達，最終導致血管細胞功能的障礙及相關(guān)疾病的發(fā)生。因此，如何減輕炎癥反應和氧化應激損傷成為治療急性腦梗死的重要方法。因此，LOX-1可能成為缺血性腦卒中急性期的治療靶點，但目前其在缺血性腦血管病中的變化和作用尚無系統(tǒng)性的闡述，因此還需進一步的實驗研究，為臨床的治療提供有力證據(jù)。
　　紫檀芪(pterostilbene)是一類非黃酮類多酚化合物，是白藜蘆醇的同系衍生物，

4、廣泛存在于藍莓、黑莓等漿果中，近來有研究表明紫檀芪具有抗炎、抗細胞增殖、抗氧化應激反應、抗真菌等作用，對阿爾茲海默病、高膽固醇血癥、腫瘤等臨床疾病均有治療作用[10-17]。
　　LOX-1是氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)在內(nèi)皮細胞的主要受體，介導內(nèi)皮細胞對細胞毒性ox-LDL的攝取[6]。生理條件下，內(nèi)皮細胞上的LOX-1主要起結(jié)合、內(nèi)吞和降解血液中存在的少量ox-LDL的作用，當存在剪切力、腫瘤壞死因子等病理刺激時，大量的

5、LOX-1被表達。近來，已有實驗表明在心肌缺血再灌注和腎臟缺血再灌注時，LOX-1的表達上調(diào)[7-8]。此外，還有研究證實LOX-1在自發(fā)性高血壓大鼠的皮層表達增多[9]，然而，LOX-1在腦缺血再灌注的作用中作用如何尚未見研究報道。
　　本實驗在實驗性小鼠短暫性大腦中動脈阻塞(transientmiddlecerebralarteryocclusion，tMCAO)模型上觀察腦缺血再灌注后應用紫檀芪，對腦缺血損傷中的神經(jīng)保護作用

6、及其對LOX-1、p-ERK1/2及NF-κB的影響。
　　方法:實驗分為兩部分:實驗一，紫檀芪的腦保護作用研究。實驗二，紫檀芪治療組的LOX-1、p-ERK1/2及NF-κB含量變化。
　　實驗一:采用成年健康雄性CD-1(ICR)小鼠，隨機分為假手術(shù)組(Sham)、單梗組(tMCAO)、溶劑對照組(Vehicle)、紫檀芪小劑量(5mg/kg)組(Pte-L)、紫檀芪中劑量(10mg/kg)組(Pte-M)及紫檀芪大劑量

7、(25mg/kg)組(Pte-H)。制作小鼠右側(cè)大腦中動脈閉塞模型(transientmiddlecerebralarterywasoccluded，tMCAO)。大腦中動脈阻塞術(shù)后1小時，拔除線栓，實現(xiàn)再灌。再灌后立即于腹腔給予紫檀芪溶液(5mg/kg，10mg/kg或25mg/kg)，并于術(shù)后24小時進行神經(jīng)功能評分，完畢后動物斷頭處死，留取病變側(cè)腦組織采用干濕重法對腦含水量進行測定，采用2％2，3，5-三苯基四唑氮紅(triphe

8、nyltetrazoliumchloride，TTC)染色測定腦梗死體積。
　　實驗二:采用成年健康雄性CD-1(ICR)小鼠，隨機分為假手術(shù)組(Sham)、單梗組(tMCAO)、溶劑對照組(Vehicle)、紫檀芪小劑量(5mg/kg)組(Pte-L)、紫檀芪中劑量（10mg/kg）組(Pte-M)及紫檀芪大劑量（25mg/kg）組(Pte-H)。干預組采取腹腔給藥。采用蛋白印跡法(WesternBlot)測定LOX-1、p-E

9、RK1/2及NF-κB的蛋白水平，實時定量聚合酶鏈反應(qR-TPCR)測定LOX-1及NF-κB的mRNA表達情況。
　　結(jié)果:
　　1、采用6分法評價小鼠神經(jīng)功能行為學。評分于tMCAO術(shù)后24h進行。tMCAO組、Vehicle組、紫檀芪小劑量組(pte-L)、紫檀芪中劑量組(pte-M)及紫檀芪大劑量組(pte-H)。小鼠均出現(xiàn)不同程度的左側(cè)肢體偏癱。紫檀芪中劑量組和大劑量組的神經(jīng)功能評分低于溶劑對照組，差異具有統(tǒng)計

10、學意義(Pte-Mvs.Vehicle:2.96±0.14vs.3.38±0.13,P＜0.05;Pte-Hvs.Vehicle:2.67±0.13vs.3.38±0.13，P＜0.05)。紫檀芪小劑量組與溶劑對照組相比，神經(jīng)功能評分無明顯差異(Pte-Lvs.Vehicle:3.21±0.10vs.3.38±0.13，P＞0.05)。
　　2、比較手術(shù)同側(cè)腦含水量。紫檀芪小劑量組(pte-L)、紫檀芪中劑量組(pte-M)及紫檀

11、芪大劑量組(pte-H)病變側(cè)腦組織含水量均低于tMCAO組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)（Pte-Lvs.Vehicle:79.67％±0.46％vs.82.33％±0.53％，P＜0.05;Pte-Mvs.Vehicle:79.00％±0.57％vs.82.33％±0.53％,P＜0.05;Pte-Hvs.Vehicle:78.85％±0.49％vs.82.33％±0.53％，P＜0.05)。
　　3、Sham組無梗死灶

12、。與tMCAO組相比，紫檀芪中劑量組和大劑量組梗死體積明顯減小，差異具有統(tǒng)計學意義（Pte-Mvs.Vehicle:46.28％±3.04％vs.50.99％±5.97％，P＜0.05;Pte-Hvs.Vehicle:34.75％±3.14％vs.50.99％±5.97％，P＜0.05)。紫檀芪小劑量組與tMCAO組相比，梗塞體積無明顯減小(Pte-Lvs.Vehicle:46.28％±3.04％vs.50.99％±5.97％，P＞0.

13、05)。
　　4、紫檀芪對LOX-1、p-ERK1/2及NF-κB表達的影響:與Vehicle組相比，Pte-M和Pte-H兩組中的LOX-1、p-ERK1/2在蛋白水平的表達明顯減少(P＜0.05)，NF-κB在細胞核內(nèi)積累減少(P＜0.05)，同樣，在PCR的檢測中發(fā)現(xiàn)，Pte-M和Pte-H兩組較溶劑對照組相比LOX-1，NF-κB的mRNA表達水平也明顯降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論:給予紫檀芪進行早期腦梗死干預后