基于P38MAPK-P65NF-κB信號(hào)通路研究枸杞多糖對(duì)小鼠局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：觀察枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide,LBP）對(duì)小鼠局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用與P38MAPK/P65NF-κB信號(hào)通路的關(guān)系并探討其對(duì)學(xué)習(xí)記憶及運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)缺陷的作用。
　　方法：1、觀察枸杞多糖對(duì)小鼠局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用
　?、俨捎肔onga法構(gòu)建小鼠大腦左側(cè)中動(dòng)脈阻塞局灶性腦缺血損傷模型；②采用TTC染色觀察枸杞多糖對(duì)腦梗死體積的影響；③激光散斑成像儀檢測(cè)枸杞多糖對(duì)腦缺血損

2、傷小鼠缺血側(cè)大腦皮層血流灌注量的影響；④腦電記錄議檢測(cè)枸杞多糖對(duì)腦缺血損傷小鼠缺血側(cè)大腦皮層總功率的影響；⑤尼氏染色、HE染色觀察枸杞多糖對(duì)腦缺血損傷小鼠缺血側(cè)腦組織病理結(jié)構(gòu)變化的影響；⑥透射電子顯微鏡觀察枸杞多糖對(duì)腦缺血損傷小鼠缺血側(cè)腦組織超微結(jié)構(gòu)變化的影響。
　　2、探討枸杞多糖對(duì)小鼠局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用與P38MAPK/P65NF-κB信號(hào)通路的關(guān)系
　?、倜庖邿晒夥z測(cè)枸杞多糖對(duì)腦缺血損傷小鼠缺血側(cè)腦組織中星形

3、膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響；②Western blot檢測(cè)枸杞多糖對(duì)腦缺血損傷小鼠缺血側(cè)腦組織中p-P38MAPK、p-P65NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10蛋白含量的影響；③RT-PCR法檢測(cè)枸杞多糖對(duì)腦缺血損傷小鼠缺血側(cè)腦組織中TNF-α、IL-1βmRNA含量的影響。
　　3、觀察枸杞多糖對(duì)腦缺血損傷小鼠學(xué)習(xí)記憶及運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)缺陷的影響
　?、倮肕orris水迷宮實(shí)驗(yàn)(Morris Water

4、 Mazetest)對(duì)腦缺血損傷小鼠學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)包括定位航行試驗(yàn)(Place navigation test,PNT)及空間探索試驗(yàn)(Spatial probe test,SPT)。定位航行試驗(yàn)：用時(shí)6天，每天從4個(gè)入水點(diǎn)各訓(xùn)練1次。訓(xùn)練中從4個(gè)入水點(diǎn)隨機(jī)選取一個(gè)，將小鼠面向池壁放入水中并記錄小鼠尋找并爬上平臺(tái)所需時(shí)間（逃避潛伏期）?？臻g探索試驗(yàn)：第6天最后一次航行實(shí)驗(yàn)完成后，撤除平臺(tái)，然后將小鼠面向池壁

5、放入平臺(tái)所在對(duì)面象限中，記錄小鼠在120秒內(nèi)穿過原平臺(tái)所在象限的次數(shù)、在目標(biāo)象限運(yùn)動(dòng)時(shí)間比和探索軌跡。②Bederson評(píng)分、轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)、握力實(shí)驗(yàn)檢測(cè)枸杞多糖對(duì)腦缺血損傷小鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)障礙的影響。
　　結(jié)果：1、枸杞多糖對(duì)小鼠局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用
　　與模型組比較，枸杞多糖(20、40mg/kg)組可顯著增加缺血側(cè)大腦皮層血流灌注量(P<0.05)；枸杞多糖(20、40mg/kg)組與模型組比較，可顯著增加大腦皮層總功率(

6、P<0.05)；與模型組比較，枸杞多糖(20、40mg/kg)組能顯著減少腦組織梗死率(P<0.05)；與模型組比較，枸杞多糖（10、20、40mg/kg）組可以減輕缺血損傷后腦組織病理性變化和神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)改變。
　　2、枸杞多糖對(duì)小鼠局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用與P38MAPK/P65NF-κB信號(hào)通路的關(guān)系
　　免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組比較，枸杞多糖(40mg/kg)顯著降低小鼠缺血側(cè)腦組織中星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)

7、胞的活化；對(duì)比模型組，枸杞多糖(40mg/kg)組可顯著降低p-P38MAPK、p-P65NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白含量在缺血區(qū)腦組織的表達(dá)（P<0.01）并能明顯升高IL-10蛋白的表達(dá)(P<0.05)；對(duì)比模型組，枸杞多糖(40mg/kg)能顯著抑制缺血腦組織中TNF-α、IL-1βmRNA表達(dá)（P<0.01）。
　　3、枸杞多糖對(duì)腦缺血損傷小鼠學(xué)習(xí)記憶及運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)障礙的改善作用
　　對(duì)比模型組，枸杞

8、多糖(20、40mg/kg)組能顯著減少腦缺血損傷小鼠逃避潛伏期(P<0.05)、增加目標(biāo)象限時(shí)間比(P<0.05)和穿越平臺(tái)次數(shù)(P<0.05)；枸杞多糖(20、40mg/kg)組與模型組比較，可顯著增加小鼠在轉(zhuǎn)棒上運(yùn)動(dòng)時(shí)間(P<0.05)；對(duì)比模型組，枸杞多糖(20、40mg/kg)組小鼠的握力評(píng)分和神經(jīng)功能缺陷評(píng)分顯著降低(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.枸杞多糖對(duì)小鼠局灶性腦缺血損傷具有保護(hù)作用。
　　2.枸杞多糖可