脆弱類桿菌的培養(yǎng)與脂多糖的提取.pdf

1、目的：探討脆弱類桿菌的分離與培養(yǎng)及其LPS的提取方法。 方法：收集臨床標(biāo)本，培養(yǎng)、分離、純化并通過生化試驗鑒定脆弱類桿菌；復(fù)蘇脆弱類桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株。將兩種菌株分別接種至厭氧菌液體培養(yǎng)基，同一條件下分別增菌培養(yǎng)，離心收集無明顯雜菌生長的增菌培養(yǎng)液洗去雜質(zhì)。冷凍干燥后稱取相同質(zhì)量的凍干菌粉，分別用改良酚水法和沸水酶解法提取LPS，純化去除雜質(zhì)后冷凍干燥稱量，并用鱟試劑顯色基質(zhì)終點顯色法分別測定內(nèi)毒素的效價濃度，用紫外光分光光度儀測定核

2、酸含量，考馬斯亮藍(lán)G-250染色法檢測蛋白含量。 結(jié)果： 1)50.Omg脆弱類桿菌干菌粉沸水酶解法提取的LPS質(zhì)量分別為：標(biāo)準(zhǔn)株0.48±0.10g，臨床株：0.48±0.08g；相同質(zhì)量的脆弱類桿菌干菌粉改良酚水法提取的LPS質(zhì)量分別為：標(biāo)準(zhǔn)株2.27±0.08g，臨床株：2.28±0.13g。標(biāo)準(zhǔn)株組和臨床株組間比較，均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異；沸水酶解法組和改良酚水法組比較，前者的產(chǎn)量低，有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異。 2

3、)50.Omg脆弱類桿菌干菌粉沸水酶解法提取的LPS效價質(zhì)量比為：標(biāo)準(zhǔn)株：O.54±0.02 EU／ng，臨床株：O.54±0.03EU／ng；相同質(zhì)量的脆弱類桿菌干菌粉改良酚水法提取的LPS效價質(zhì)量比為：標(biāo)準(zhǔn)株：0.59±0.10 EU／ng，臨床株：O.57±0.03EU／ng。標(biāo)準(zhǔn)株組和臨床株組間比較，沸水酶解法組和改良酚水法組比較，均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。 3)兩種方法提取兩種菌株的LPS經(jīng)紫外光分光光度法和考馬斯亮藍(lán)染色法