芳香烴受體及肝臟代謝酶在飲用水有機提取物染毒大鼠肝臟中的表達及意義.pdf

1、目的：利用課題組前期制備的飲用水有機提取物致大鼠肝損傷動物模型，對芳香烴受體及下游調(diào)控基因（肝臟代謝酶）的表達及活性進行觀察，探討飲用水有機污染物的異常肝臟生物轉(zhuǎn)化在肝損傷中的作用。
　　方法：于2012年7-9月（豐水期）采集該地的末梢水水樣并制備有機提取物。將50只清潔級SD大鼠隨機分為5組，分別為空白對照組、溶劑對照（玉米油）組和飲用水有機提取物低中高3個染毒組（劑量分別為5L/kg、20L/kg、80L/kg），每組10只

2、，雌雄各半。采用經(jīng)口灌胃方式進行染毒，每天1次，連續(xù)染毒12周。制備大鼠血清，采用分光光度法檢測天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate aminotransferas，AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（Alanine amunotransferase，ALT）、膽堿酯酶（Cholinesterase，CHE）的活力及總蛋白（Total protein，TP）、白蛋白（Albumin，ALB）的含量；提取肝組織總RNA，采用實時熒光定量PCR（RT-q

3、RCR）法檢測芳香烴受體（aryl hydrocarbon receptor，AhR）、熱休克蛋白90（heat shock protein90，HSP90）、芳香烴受體核轉(zhuǎn)位蛋白(aryl hydrocarbon nuclear translocator，ARNT）、細胞色素1A2（CYP1A2）、細胞色素2E1（CYP2E1）、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶A1（glutathione-S-transferase A1，GSTA1）的mRNA

4、表達情況；提取肝組織總蛋白，采用蛋白印記（Western Blot）法檢測AhR、HSP90、ARNT、CYP1A2、CYP2E1、GSTA1的蛋白表達情況；制備肝勻漿，采用分光光度法檢測谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（glutathione-S-trans ferase，GSTs）活力；制備肝微粒體，熒光分光光度法和活性比色法分別測定CYP1A2與CYP2E1酶活性；采用Spearman相關(guān)對芳香烴受體和肝臟代謝酶及肝損傷的相關(guān)性進行分析。

5、r>　　結(jié)果：（1）隨著染毒劑量的增加，大鼠血清CHE活力在中、高劑量組明顯升高，而ALT、AST活力僅在高劑量組升高（P<0.05）；與對照組相比，TP和ALB水平在高劑量組明顯下降有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。（2）與對照組相比，HSP90的mRNA和蛋白表達水平在低、中、高劑量組都明顯升高，而AhR與ARNT的mRNA和蛋白表達水平僅在中、高劑量組升高（P<0.05）。（3）與對照組相比，CYP1A2與 GSTA1的mRNA和蛋白

6、表達水平在中、高劑量組明顯升高，而CYP2E1的mRNA和蛋白表達水平僅在高劑量組升高（P<0.05）；隨著染毒劑量的增加，高劑量組GSTA1 mRNA和蛋白表達水平比中劑量組有所降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；CYP1A2和GSTs酶活性在中劑量與高劑量組顯著增加，而CYP2E1酶活性僅在高劑量組增加（P<0.05）；與中劑量組相比，高劑量組GSTs的酶活性則明顯降低（P<0.05）。（4）肝臟代謝酶CYP1A2、GSTs酶

7、活性與AhR蛋白表達水平均呈正相關(guān)關(guān)系；染毒大鼠血清CHE水平與AhR的蛋白表達水平及CYP1A2、CYP2E1、GSTs酶活性均呈正相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論：（1）在本實驗條件下，較高劑量飲用水有機提取物暴露可活化芳香烴受體AhR，從而誘導其配體HSP90及ARNT的轉(zhuǎn)錄表達和翻譯表達。（2）芳香烴受體通路的異常上調(diào)，調(diào)控下游基因代謝酶CYP1A2與GSTA1的mRNA和蛋白表達增強，誘導代謝酶活性升高。（3）肝臟代謝酶活性異常升高