TMPRSS4在肝細(xì)胞癌復(fù)雜轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf

1、目的：術(shù)后轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)預(yù)后差的主要原因。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transitions，EMT)是目前上皮來源的惡性腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的重要原因，其與肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。TMPRSS4(transmembrane protease serine4)為Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶(TTSPs)中的新成員，能夠促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)、侵

2、襲和轉(zhuǎn)移。然而，TMPRSS4是否在肝細(xì)胞癌中表達(dá)及其是否對(duì)肝細(xì)胞癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移產(chǎn)生影響，目前仍未明確。因此本研究觀察過表達(dá)TMPRSS4對(duì)肝細(xì)胞癌細(xì)胞EMT相關(guān)基因產(chǎn)物E-鈣黏素(E-cadherin，E-cad)，波形蛋白(Vimentin，Vim)及轉(zhuǎn)錄抑制因子Snail表達(dá)的影響，探討TMPRSS4在肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中的重要作用。
　　 方法：
　　 (1)構(gòu)建慢病毒轉(zhuǎn)染TMPRSS4過表達(dá)及空白載體的人肝細(xì)胞癌細(xì)

3、胞BEL-7402，用RT-PCR及Western Blot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染TMPRSS4基因的效率；
　　 (2)分組情況：分為3組，Ⅰ未轉(zhuǎn)染的BEL-7402組；ⅡGFP空白載體對(duì)照BEL-7402組；Ⅲ過表達(dá)TMPRSS4的BEL-7402組；
　　 (3)觀察指標(biāo)及方法：以CCK8試劑盒檢測(cè)過表達(dá)TMPRSS4基因?qū)θ烁渭?xì)胞癌細(xì)胞BEL-7402細(xì)胞增殖能力的影響；RT-PCR及Western Blot檢測(cè)各組中EM

4、T相關(guān)基因產(chǎn)物E-cadherin、Snail及Vimentin的mRNA及蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：成功轉(zhuǎn)染TMPRSS4過表達(dá)的肝細(xì)胞癌細(xì)胞BEL-7402，并篩選得到穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株，TMPRSS4過表達(dá)后肝細(xì)胞癌細(xì)胞BEL-7402的增值能力與BEL-7402組相比無明顯增強(qiáng)；并且TMPRSS4過表達(dá)后EMT相關(guān)基因產(chǎn)物Snail、Vimentin的mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯升高，而E-cadherin的表達(dá)明顯受到