表達(dá)小鼠重組IL-23基因的小鼠乳腺癌細(xì)胞系MA891-IL-23的建立.pdf

1、目的：腫瘤是嚴(yán)重影響人類健康的疾病，腫瘤的形成和發(fā)展與宿主免疫監(jiān)視功能的異常及腫瘤細(xì)胞免疫逃逸作用密切相關(guān)。乳腺癌是一種嚴(yán)重危害婦女健康的惡性腫瘤，在發(fā)達(dá)國(guó)家及我國(guó)的一些大型工業(yè)化城市，乳腺癌的發(fā)病率已居?jì)D女惡性腫瘤的首位。目前，手術(shù)、化療和放療仍是乳腺癌的主要治療方法，但是都存在著一定的局限性。通過目前常用方法治療后，乳腺癌患者的五年生存率仍不理想；因此，探討新的治療方法和措施刻不容緩。近年來，腫瘤的基因治療和免疫生物治療發(fā)展迅速，將

2、可能成為腫瘤治療的新亮點(diǎn)。腫瘤的免疫治療不僅能提高宿主的免疫能力，特異性殺傷腫瘤細(xì)胞，而且對(duì)正常組織細(xì)胞有較少的毒副作用。白細(xì)胞介素23(IL-23)是2000年發(fā)現(xiàn)的一種異二聚體細(xì)胞因子，可促進(jìn)記憶性T細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)活化的T細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞產(chǎn)生干擾素-γ(IFN-γ)等細(xì)胞因子，具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)活性，參與自身免疫性疾病、慢性炎癥反應(yīng)和某些感染性疾病的發(fā)病和調(diào)控。有報(bào)道提出，IL-23可通過誘導(dǎo)和增強(qiáng)小鼠脾細(xì)胞CTL活性和IFN-γ等

3、細(xì)胞因子的產(chǎn)生而發(fā)揮抗腫瘤作用。因此，IL-23作為腫瘤基因治療的候選因子越來越受到關(guān)注。然而，IL-23抗腫瘤作用的具體機(jī)制還不十分清楚。本研究利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，將鼠源IL-23基因轉(zhuǎn)入小鼠乳腺癌細(xì)胞株MA-891，研究了IL-23基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞MA-891體外生長(zhǎng)及生物學(xué)性狀的影響，為乳腺癌的基因治療研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.IL-23基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞的構(gòu)建：將攜帶mIL-23基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(LXSN/I

4、L-23)，經(jīng)過ψ2和PA317包裝細(xì)胞包裝成含IL-23基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒，利用該病毒將mIL-23基因?qū)隡A 891細(xì)胞，經(jīng)G418篩選后獲得表達(dá)miL-23的陽性細(xì)胞克隆MA891/IL-23。 2.MA891/IL-23細(xì)胞生物學(xué)形狀分析用RT-PCR法檢測(cè)MA891/IL-23細(xì)胞IL-23基因的表達(dá)；用細(xì)胞免疫組化法檢測(cè)MA891/IL-23細(xì)胞中IL-23蛋白的表達(dá)；用ELISA法檢測(cè)MA891/IL-23細(xì)胞分

5、泌raiL/23及raiL-23誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的情況；用MTT比色法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的體外增殖；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期以及細(xì)胞表面分子CD80、CD86、MHCⅠ、 MHCⅡ、Fas的表達(dá)。 結(jié)論：IL-23基因?qū)?MA891 細(xì)胞后，構(gòu)建的MA891/IL-23細(xì)胞能夠分泌IL-23，對(duì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和增殖反應(yīng)無明顯影響；MA891/IL-23細(xì)胞表達(dá)CD80、CD86、MHCⅠ、MHC Ⅱ、Fas的水平無顯著性差