Nedd4-2-ClC-2泛素化信號(hào)通路在大鼠內(nèi)側(cè)顳葉癲癇發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、目的:研究內(nèi)側(cè)顳葉癲癇(mesial temporal lobe epilepsy, mTLE)大鼠模型以及阻斷泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin-proteasome system，UPS)后各個(gè)時(shí)期海馬組織的病理學(xué)改變，分析泛素(Ubiquitin，Ub)、Nedd4-2、C(1)C-2的表達(dá)變化，探討Nedd4-2/C(1)C-2泛素化信號(hào)通路在mTLE發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法:25日齡SD大鼠75只（清潔級(jí)），隨機(jī)

2、分為3組，對(duì)照組、模型組、MG-132（蛋白酶體抑制劑）預(yù)處理組。模型組及預(yù)處理組大鼠分別予以相應(yīng)藥物（匹羅卡品、氯化鋰、MG-132等）腹腔注射進(jìn)行造模，誘導(dǎo)出現(xiàn)癲癇持續(xù)狀態(tài)(Status epilepticus，SE)，對(duì)照組用等量生理鹽水代替。造模成功后，根據(jù)SE后獲取標(biāo)本的時(shí)間不同將各組分別隨機(jī)分為3個(gè)亞組，即急性期組、潛伏期組、慢性期組。(1)對(duì)照組、模型組的各亞組:應(yīng)用免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation

3、，Co-Ip)技術(shù)、免疫熒光雙標(biāo)結(jié)合激光共聚焦技術(shù)分析大鼠海馬中Ub與Nedd4-2是否存在相關(guān)性;(2)對(duì)照組、模型組、MG-132預(yù)處理組的各亞組:對(duì)各組大鼠模型進(jìn)行行為學(xué)觀察;對(duì)各組大鼠腦組織切片行HE染色、尼氏染色，觀察各組神經(jīng)元的丟失，Timm染色觀察苔蘚纖維出芽(Moss fiber sprouting，MFS);采用Western blot技術(shù)檢測各組大鼠海馬中Ub、Nedd4-2、C(1)C-2的表達(dá)水平。
　　結(jié)

4、果:對(duì)照組大鼠行為學(xué)及組織病理學(xué)均無改變。氯化鋰-匹羅卡品腹腔注射造模成功率為90.0％，死亡率為24.1％，有73.7％的大鼠在8周后出現(xiàn)慢性自發(fā)發(fā)作。模型組大鼠海馬神經(jīng)元丟失明顯，可見MFS，MG-132預(yù)處理組病理改變較模型組更為明顯，兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　Co-IP及免疫熒光雙標(biāo)結(jié)合激光共聚焦技術(shù)證明Ub與Nedd4-2是有相互關(guān)系的蛋白。Western bolt檢測模型組和MG-132預(yù)處理組

5、Ub、Nedd4-2、CIC-2表達(dá)均存在變化。Ub結(jié)果:模型組與對(duì)照組比較表達(dá)無明顯變化;MG-132預(yù)處理組與對(duì)照組及模型組比較，急性期及潛伏期中表達(dá)上升，慢性期中表達(dá)下降(P＜0.05);Nedd4-2結(jié)果:模型組與對(duì)照組比較，急性期及潛伏期中表達(dá)下降，慢性期中表達(dá)上升(P＜0.05);MG-132預(yù)處理與對(duì)照組比較，三個(gè)時(shí)期表達(dá)均下降（P＜0.05），與模型組比較，在急性期、慢性期表達(dá)下降，潛伏期表達(dá)上升(P＜0.05);CIC

6、-2結(jié)果:模型組和對(duì)照組的比較與Nedd4-2一致;MG-132預(yù)處理組與對(duì)照組比較，在急性期及慢性期表達(dá)降低，在潛伏期升高（P＜0.05），與模型組的比較與Ub相同。
　　結(jié)論:(1)在正常及mTLE大鼠模型的海馬中均存在Ub介導(dǎo)的信號(hào)通路，Nedd4-2是這一途徑中的一種關(guān)鍵的泛素-蛋白連接酶(ubiquitin-protein ligases，E3s)，CIC-2是Nedd4-2的靶蛋白之一;(2)Nedd4-2/C(1)C