TIM-1信號(hào)通路在IgA腎病大鼠發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、目的:
　　觀察IgA腎病(IgA nephropathy,IgAN)大鼠和正常大鼠中T細(xì)胞免疫球蛋白與黏蛋白域基因-1(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-1,TIM-1)信號(hào)通路與多種T細(xì)胞亞群的表達(dá)關(guān)系，初步探討TIM-1信號(hào)通路在IgAN發(fā)病中的作用和機(jī)制。
　　方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及實(shí)驗(yàn)性IgAN大鼠模型的建立：隨機(jī)將20只SPF級(jí)SD雄性大鼠分

2、為IgAN模型組及正常對(duì)照組。IgAN模型組予0.1％牛血清蛋白（BSA）溶液隔日灌胃+CCL4蓖麻油混合劑皮下注射/周+脂多糖（LPS）尾靜脈注射2次，以建立大鼠實(shí)驗(yàn)性IgAN模型；正常對(duì)照組則以等體積PBS溶液灌胃+等體積生理鹽水皮下注射及尾靜脈注射。
　　2.大鼠實(shí)驗(yàn)性IgAN模型的鑒定及觀察指標(biāo)：觀察大鼠一般情況及大鼠24h尿蛋白定量、血白蛋白、腎功能等指標(biāo)變化，第9周末摘取大鼠腎臟行HE染色及IgA免疫熒光，以鑒定大鼠實(shí)

3、驗(yàn)性IgAN模型的建立，并進(jìn)行大鼠腎臟病理?yè)p傷的Katafuchi評(píng)分。同時(shí)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)兩組大鼠腎組織中TIM-1，IL-4、IFN-γ及FOXP3的表達(dá)，實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)兩組大鼠腎組織中TIM-1 mRNA含量。
　　3.比較兩組間臨床指標(biāo)，病理?yè)p傷Katafuchi評(píng)分，TIM-1 mRNA含量，TIM-1、IL-4、IFN-γ及FOXP3免疫組化表達(dá)半定量積分的差異，并分別分析IgAN組TIM-1 mRNA含量與臨床

4、指標(biāo)、Katafuchi評(píng)分相關(guān)性及TIM-1半定量積分與IL-4、IFN-γ及FOXP3免疫組化表達(dá)半定量積分相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.兩組大鼠一般情況變化；
　　IgAN模型組大鼠在實(shí)驗(yàn)初期一般情況對(duì)比正常對(duì)照組無(wú)明顯差異，自第6周后出現(xiàn)萎靡、少動(dòng)，體重增長(zhǎng)減緩，第8周后上述癥狀加重。同時(shí)對(duì)比正常對(duì)照組體重增長(zhǎng)情況，自第6周末大鼠體重增長(zhǎng)明顯減緩，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。IgAN模型組大鼠第4、9周末

5、24尿蛋白定量顯著增加，高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；IgAN模型組大鼠第4、9周末血白蛋白顯著下降，低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；兩組大鼠血肌酐均無(wú)明顯升高，兩組間對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.兩組大鼠腎臟病理改變及腎臟病理?yè)p傷評(píng)分：
　　正常對(duì)照組大鼠腎組織IgA免疫熒光為陰性，光鏡下可見(jiàn)正常腎小球結(jié)構(gòu)，小管、間質(zhì)無(wú)明顯改變；IgAN模型組腎組織IgA免疫熒光則可

6、見(jiàn)沿系膜區(qū)有不同程度沉積，光鏡下見(jiàn)腎小球彌漫性輕、中度系膜增寬，系膜細(xì)胞增生，腎間質(zhì)見(jiàn)纖維化伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　大鼠Katafuchi評(píng)分為IgAN模型組（6.30±1.95）顯著高于正常對(duì)照組（1.30±0.82），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　3.免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果：
　　TIM-1在正常對(duì)照組于腎小管胞漿少量陽(yáng)性表達(dá)，而在IgAN模型組于腎小球胞核和腎小管胞漿中廣泛陽(yáng)性表達(dá)，定量積分對(duì)比顯著升高且差異

7、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　IL-4在正常對(duì)照組于腎小管胞漿少量陽(yáng)性表達(dá)，而在IgAN模型組于腎小管胞漿中廣泛陽(yáng)性表達(dá)，定量積分對(duì)比顯著升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　IFN-γ在正常對(duì)照組和IgAN模型組均只在腎小管胞核中有少量陽(yáng)性表達(dá)，定量積分對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　FOXP3在正常對(duì)照組和IgAN模型組均只在腎小球胞核中有少量陽(yáng)性表達(dá)，定量積分對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0

8、.05）。
　　4.實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)結(jié)果
　　IgAN模型組腎臟TIM-1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　5.相關(guān)性分析結(jié)果
　　在IgAN模型組中，腎組織TIM-1表達(dá)量與24h尿蛋白定量及Katafuchi評(píng)分呈正相關(guān)，與血白蛋白呈負(fù)相關(guān)，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　在IgAN模型組中，腎組織TIM-1表達(dá)量與腎組織表達(dá)IL-4呈正相關(guān)且有

9、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），腎組織TIM-1表達(dá)量與腎組織表達(dá)IFN-γ呈正相關(guān)，與IFN-γ/IL-4呈負(fù)相關(guān)，與腎組織FOXP3表達(dá)無(wú)相關(guān)性，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.本研究建立以BSA+CCl4+LPS誘導(dǎo)的大鼠IgAN模型，并發(fā)現(xiàn)TIM-1 mRNA的表達(dá)上調(diào)，且與IgAN大鼠的24尿蛋白定量，腎臟病理組織學(xué)損傷程度正相關(guān)，提示TIM-1信號(hào)通路可能參與大鼠IgAN的發(fā)病及進(jìn)展。