乙型肝炎病毒基因組EnhⅡ-BCP-PreC區(qū)的變異分析.pdf

1、HBV基因組由長(zhǎng)約3.2 kb的部分雙鏈環(huán)狀DNA組成的，分為結(jié)構(gòu)基因和調(diào)節(jié)基因兩部分，其結(jié)構(gòu)基因區(qū)含S，C，P和X四個(gè)開放讀碼框架。HBV基因組的調(diào)節(jié)基因EnhⅡ(nt.1636-1741)調(diào)節(jié)S，C及X mRNA的轉(zhuǎn)錄;BCP(nt.1742-1849)調(diào)節(jié)HBV pgRNA和preC mRNA的轉(zhuǎn)錄。據(jù)認(rèn)為這一基因區(qū)域的BCP中A1762T/G1764A，T1753C熱點(diǎn)突變;EnhⅡ中的C1653T突變及preC中G1896A的

2、突變與HBV導(dǎo)致的肝病的演化與嚴(yán)重性密切相關(guān)。但是關(guān)于江西地區(qū)肝病患者感染的HBV基因組中EnhⅡ，BCP及preC區(qū)域內(nèi)的這些熱點(diǎn)突變未見報(bào)道。
　　目的：⑴分析江西南昌HBV慢性感染ASC、CHB、LC、HCC患者的血清HBV基因組EnhⅡ/BCP/preC區(qū)域基因變異情況。⑵探討HBV EnhⅡ/BCP/preC基因變異對(duì)HBV所致的慢性肝病進(jìn)展的影響。
　　方法：收集來我院就診的HBV慢性感染患者115例，其中ASC

3、組35，CHB組40例，LC組24例，HCC組16例，健康體檢者2例血清，PCR擴(kuò)增EnhⅡ/BCP/preC基因，產(chǎn)物送檢測(cè)序，對(duì)測(cè)序結(jié)果分析采用DNAMAN軟件與GenBank參考標(biāo)準(zhǔn)株比對(duì)，找出DNA序列中的突變位點(diǎn)。血清HBV DNA拷貝數(shù)檢測(cè)采用熒光定量PCR法(Fluorescence quantitative PCR，F(xiàn)Q-PCR)，HBV免疫標(biāo)志物檢測(cè)用ELISA法。全部數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均運(yùn)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)

4、資料統(tǒng)計(jì)采用x2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用(x)±s，比較兩均數(shù)采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，全部數(shù)據(jù)均進(jìn)行雙邊檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：①HBVDNA EnhⅡ/BCP/preC基因突變位點(diǎn)C1653T、T1753C和A1762T/G1764A在HCC和LC組發(fā)生率都明顯高于：ASC和CHB組(p＜0.05)，G1896A在HCC組發(fā)生率明顯高于ASC和CHB組(p＜0.05)。②突變位點(diǎn)C1653T、T1753C、A176

5、2T/G1764A和G1896A在43例HBeAg(-)患者中的發(fā)生率（分別為11.6％、20.9％、37.2％和18.6％）都明顯高于72例HBeAg(+)患者（分別為1.39％、2.78％、11.1％和4.17％，P＜0.05）;③發(fā)生C1653T突變的6例患者HBV DNA定量與無突變的109例患者之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.69）;發(fā)生T1753C突變的11例患者的HBV DNA定量(4.53±1.87 log copies/m

6、L)明顯低于無突變的104例患者(6.90±1.56 log copies/mL，P=0.00);發(fā)生A1762T/G1764A雙突變的24例患者HBV DNA定量(5.98±1.15 log copies/mL)明顯低于無突變的91例患者(7.35±0.93 log copies/mL，P=0);11例患者發(fā)生G1896A突變，HBV DNA拷貝數(shù)定量值(5.66±1.07 log copies/mL)明顯低于104例無突變的患者拷貝

7、數(shù)(7.14±0.87 log copies/mL, P=0.03)。
　　結(jié)論：①突變位點(diǎn)C1653T、T1753C和A1762T/G1764A在HCC和LC形成進(jìn)展中可能發(fā)揮了重要作用，G1896A突變對(duì)HCC的發(fā)生可能發(fā)揮了作用;②C1653T、T1753C、A1762T/G1764A和G1896A4個(gè)突變可能抑制了HBeAg的表達(dá);③T1753C、A1762T/G1764A和G1896A突變可能減弱了HBV的復(fù)制水平，但C