乙型肝炎病毒全基因組轉(zhuǎn)基因小鼠的生物學特性研究.pdf

1、該課題就是利用我們實驗室建立并優(yōu)選的乙肝全基因組轉(zhuǎn)基因小鼠C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU"3號"品系的F6-F17代小鼠為實驗對象,從DNA、RNA、蛋白質(zhì)、病毒學、病理學和免疫學角度,綜合研究了該品系轉(zhuǎn)基因小鼠的生物學特性,使其成為可應用于乙型肝炎病毒相關研究的實驗動物模型.本研究采用基因組DNAPCR、Southern blotting和DNA測序的方法,分析了HBV基因在轉(zhuǎn)基因小鼠中的整合特征,結果表明,adr亞型的

2、乙型肝炎病毒全基因組轉(zhuǎn)基因已穩(wěn)定的整合在轉(zhuǎn)基因小鼠的基因組中,并能通過生殖系以孟德爾遺傳方式在世代間穩(wěn)定遺傳.利用RT-PCR和real-time RT-PCR對轉(zhuǎn)基因小鼠肝組織中的總RNA進行定性和半定量檢測,分析了HBV基因在轉(zhuǎn)基因小鼠中的轉(zhuǎn)錄特征,結果發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)基因小鼠中整合的HBV基因能夠轉(zhuǎn)錄出病毒的所有mRNAs,病毒mRNA的半定量檢測可用于評價抗病毒治療的研究,是評價該轉(zhuǎn)基因小鼠的重要指標之一.我們進一步對該品系轉(zhuǎn)基因小鼠進

3、行了組織病理學、血清酶學和免疫學的檢測,分析了轉(zhuǎn)基因小鼠的病理學和免疫學特征.本課題的研究表明,我們建立的乙肝轉(zhuǎn)基因小鼠C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU"3號"品系具有基因組中穩(wěn)定整合HBV基因組DNA;肝組織中有病毒mRNA的轉(zhuǎn)錄、病毒蛋白的表達和病毒顆粒的包裝;病毒蛋白和病毒顆?？煞置谌胙?部分轉(zhuǎn)基因小鼠出現(xiàn)了類似于人類慢性HBV無癥狀攜帶者的肝組織病理性損傷;肝組織中浸潤的單個核細胞為CD3<'+>、CD4<'+>T細