不同基因突變對(duì)特發(fā)性低促性腺激素性性腺功能減退癥患者的臨床特點(diǎn)、隱睪和生精療效的影響.pdf

1、目的：
　　 (1)在中國(guó)男性特發(fā)性低促性腺激素性性腺功能減退癥(IHH)患者中，明確基因突變的發(fā)生率是多少？各致病基因比重如何？
　　 (2)不同基因所致IHH，各有何臨床特點(diǎn)？這些臨床特點(diǎn)，能否提示某種基因突變？
　　 (3)有多少患者存在雙（寡）基因突變？和單基因突變的患者相比，雙（寡）基因突變的IHH患者，是否存在更嚴(yán)重的性腺軸功能損傷？
　　 (4)根據(jù)基因檢測(cè)和臨床表現(xiàn)（有無(wú)嗅覺(jué)）對(duì)IHH患者

2、進(jìn)行亞組分析，評(píng)價(jià)不同患者人群的精子生成差異。
　　 方法：
　　 (1)基因研究:采用基因芯片(NimbleGen2.1M基因芯片組)，對(duì)IHH患者和部分家屬的19個(gè)IHH基因外顯子和相鄰內(nèi)含子進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)每一個(gè)改變的堿基，通過(guò)多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行多態(tài)性分析或突變狀態(tài)的檢測(cè)。利用SIFT和Polyphen-2計(jì)算機(jī)模擬軟件，對(duì)突變基因及其編碼蛋白質(zhì)的功能進(jìn)行預(yù)測(cè)。對(duì)明確的基因突變檢測(cè)結(jié)果，用經(jīng)典sanger PCR方法進(jìn)行驗(yàn)

3、證。根據(jù)基因突變情況，把患者分為明確基因突變組、可疑基因突變組、無(wú)效基因突變組和未檢測(cè)到基因突變組。
　　 (2)臨床研究:收集患者的臨床資料，包括性別、年齡、初診和隨訪中的睪丸體積、垂體前葉激素水平、生精治療后的睪酮水平、睪丸體積、精子數(shù)量和愛(ài)人妊娠情況。根據(jù)睪丸體積和生精治療的效果，對(duì)患者的精子生成能力進(jìn)行半定量評(píng)分，分為0、1、2、3四個(gè)等級(jí)，稱(chēng)為“生精指數(shù)”。分?jǐn)?shù)越高，提示生精治療的效果越好，產(chǎn)生精子的可能性越大，精子數(shù)

4、量越多。
　　 (3)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:不同組之間的比較:對(duì)符合正態(tài)分布的連續(xù)性變量，采用非配對(duì)t檢驗(yàn);對(duì)符合正態(tài)分布的有序分類(lèi)變量，采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。除非特殊說(shuō)明，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean±SE)表示。
　　 結(jié)果：
　　 (1)男性259例IHH患者中，明確基因突變87例(33.6％)，可疑基因突變35例(13.5％)，無(wú)效基因突變69例(26.8％)，未檢測(cè)到已知基因突變68例(26.2

5、％)。明確基因突變是指，基因突變已被報(bào)道過(guò)，或已通過(guò)體外試驗(yàn)驗(yàn)證了功能缺陷，或發(fā)生于剪切位點(diǎn)的堿基改變，或通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬軟件（SIFT和Polyphen-2檢測(cè)方法）提示蛋白質(zhì)功能受到明顯損害?？梢苫蛲蛔兪侵?發(fā)生率小于1％的SNP，或以常染色體隱性遺傳方式的致病基因發(fā)生雜合突變（即兩個(gè)等位基因中，有一個(gè)發(fā)生可導(dǎo)致氨基酸變化的突變）。無(wú)效基因突變是指，內(nèi)含子（非剪切位點(diǎn)）存在異?；蛲怙@子發(fā)生同義突變。未檢測(cè)到基因突變是指，IHH基因的

6、外顯子和相鄰內(nèi)含子均無(wú)堿基改變。
　　 (2)明確基因突變組(N=87): CHD7基因突變16例(19.1％)，F(xiàn)GF8有2例(2.2％)，F(xiàn)GFR1有20例(22.5％)，GNRHR有4例(4.5％)，KAL1有14例(15.7％)，KISS1R有2例(2.2％)，LEPRE有1例(1.1％)，LHB有3例(3.4％)，NELF有1例(1.1％)，PROK2有4例(4.5％)，PROKR2有19例(21.3％)，WDR11有

7、1例(1.1％)。CHD7、KAL1、FGFR1和PROKR2是主要的突變基因，占明確基因突變組的79％。
　　 (3)在明確基因突變組(N=87):三基因突變有2例(2.2％)，雙基因突變18例(20.7％)，單基因突變67例(77.0％)。單基因突變和雙（寡）基因突變組之間，初始睪丸體積、生精指數(shù)無(wú)顯著性差異。
　　 (4)在FGFR1、CHD7、KAL1和PROKR2突變導(dǎo)致IHH的四組患者中，F(xiàn)GFR1突變組的初

8、始睪丸體積和生精指數(shù)顯著低于其他三組。
　　 (5)明確基因突變組(N=87)的生精指數(shù)顯著低于可疑基因突變組(N=35)(0.99±0.08 vs.1.47±0.14，P=0.003)和未檢測(cè)到基因突變組(N=68)(0.99±0.08 vs.1.37±0.10，P=0.003)。明確基因突變組的nIHH患者(N=31)，生精指數(shù)顯著低于未檢測(cè)到基因突變組的nIHH患者(N=30)(1.09±0.13vs.1.70±0.10，

9、P=0.0006)。而明確基因突變組的KS(N=56)的生精指數(shù)和未檢測(cè)到基因突變組的KS(N=38)無(wú)顯著性差異。
　　 (6)根據(jù)基因型和臨床嗅覺(jué)表型對(duì)IHH患者進(jìn)行分類(lèi)，生精指數(shù)從低到高分別是:FGFR1突變組＜KS+明確基因突變的nIHH患者＜未檢測(cè)到基因突變的nIHH患者。
　　 (7)無(wú)論在明確基因突變組內(nèi)還是未檢測(cè)到基因突變組內(nèi)，nIHH患者的BMI均高于KS患者。在全部IHH患者中，nIHH人群BMI大于

10、KS人群。
　　 (8)不同基因突變和臨床特異表現(xiàn)之間的相關(guān)性:有家族史的患者更易檢出KAL1突變。FGFR1突變患者可有矮小、唇腭裂和牙齒發(fā)育異常。KAL1和CHD7突變均可發(fā)生單側(cè)腎臟發(fā)育不良。
　　 (9)有7例(2.7％) IHH患者的性腺軸功能發(fā)生逆轉(zhuǎn)。其中KAL1基因突變2例，PROKR2和LHB突變各1例。其他3例未檢測(cè)到基因突變。患者初診年齡22.4±0.8歲，確定逆轉(zhuǎn)的年齡為25.1±0.7歲;此人群的

11、GnRHa（曲普瑞林）興奮試驗(yàn)LH峰值為19.1±2.2(7.7-33IU/L)，患者的初始睪丸體積為6.0±0.6mL。
　　 結(jié)論：
　　 (1)約1/3的男性IHH患者可檢測(cè)到明確致病基因。CHD7、FGFR1、PROK2和KAL1四個(gè)基因突變占全部突變約80％，其中FGFR1突變患者的性腺軸功能損傷最為嚴(yán)重。(2)在明確基因突變IHH患者中，23％的患者存在雙（寡）基因突變，77％為單基因突變，兩組患者的生精指數(shù)