鹽酸羥哌吡酮(YL-0919)的抗抑郁效應(yīng)和機(jī)制研究.pdf

1、抑郁癥是致病率和致殘率最高的精神疾病之一，因其具有高發(fā)病、高自殺、高復(fù)發(fā)、高致殘率，和低識(shí)別、低就診、低治療率成為嚴(yán)重的全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題和突出社會(huì)問(wèn)題。WHO預(yù)測(cè)，到2020年抑郁癥將成為危害人類健康的第二大疾患。目前臨床最為廣泛的一線絕大多數(shù)抗抑郁藥物，包括5-HT重?cái)z取抑制劑（SSRIs，如氟西汀）、5-HT/NE雙重重?cái)z取抑制劑（SNRIs，如度洛西?。┑染嬖谄鹦а舆t、有效率不高、導(dǎo)致性功能障礙和自殺傾向等較嚴(yán)重缺陷。近年來(lái)基

2、于“優(yōu)化的單胺策略”，5-HT1A受體部分激動(dòng)和選擇性的5-HT再攝取抑制雙靶標(biāo)抗抑郁藥(serotonin partial agonist and reuptake inhibitors，SPARIs)，因其具有強(qiáng)效、快速起效、潛在低自殺傾向等特點(diǎn)，以及不良反應(yīng)（包括性功能障礙和體重增加等）發(fā)生率低的優(yōu)勢(shì)，已成為新型藥物的代表方向。鹽酸羥哌吡酮(YL-0919)是軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所正在研發(fā)的兼有5-HT1A部分激動(dòng)和5-HT

3、重?cái)z取抑制雙重靶標(biāo)的1.1類抗抑郁專利新藥，具有較強(qiáng)的新藥研發(fā)前景，本研究旨在系統(tǒng)探討其行為活性及靶標(biāo)機(jī)制。
　　目的:主要研究了兼有5-HT1A受體(5-HT1A R)激動(dòng)和5-HT重?cái)z取抑制雙重活性抗抑郁新藥YL-0919的活性特點(diǎn)及其靶標(biāo)調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法:采用放射性配體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)分別研究YL-0919與大鼠突觸體蛋白中5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(SERT)和5-HT1A受體的親合性以及受體選擇性，并進(jìn)一步制備含有SERT的

4、大鼠突觸體蛋白以及采用穩(wěn)定表達(dá)人源SERT（hSERT）的HEK-293細(xì)胞系進(jìn)行YL-0919對(duì)5-HT的重?cái)z取抑制作用研究。分別采用小鼠懸尾和小鼠強(qiáng)迫游泳兩個(gè)經(jīng)典行為絕望模型評(píng)價(jià)新藥YL-0919單次給藥的抗抑郁活性，并采用相關(guān)5-HT受體阻斷劑，明確YL-0919抗抑郁作用的相關(guān)受體。在小鼠獲得性無(wú)助模型上評(píng)價(jià)YL-0919亞慢性給藥的抗抑郁活性，在zero-迷宮、高架十字迷宮、Vogel電擊沖突飲水、新奇抑制攝食行為模型中探討單

5、次或慢性給予大鼠YL-0919的抗焦慮活性。采用小鼠新奇抑制攝食、懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)對(duì)YL-0919和同靶標(biāo)抗抑郁藥維拉佐酮的抗焦慮、抗抑郁效果進(jìn)行比較。在受體后機(jī)制研究中，首先在離體水平用競(jìng)爭(zhēng)免疫熒光法檢測(cè)YL-0919對(duì)正常大鼠前額皮層突觸膜腺苷酸環(huán)化酶(AC)活性的影響。在整體水平，檢測(cè)YL-0919長(zhǎng)期給藥后小鼠海馬、前額皮層Foskolin激活的AC活性的變化。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)長(zhǎng)期給藥后小鼠海馬PKA活

6、性的變化，并在小鼠懸尾和小鼠強(qiáng)迫游泳模型上檢測(cè)腦室注射選擇性蛋白激酶A(PKA)抑制劑H-89對(duì)YL-0919抗抑郁活性的阻斷作用。采用蛋白免疫印跡分析法(Western Blot)考察慢性給藥YL-0919對(duì)小鼠海馬BDNF、p-CREB、p-ERK表達(dá)的調(diào)控作用。
　　結(jié)果:研究表明，YL-0919對(duì)SERT以及5-HT1A受體均具有高親和力結(jié)合，Ki分別為0.72 nM和0.19nM; YL-0919與NET（NE轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白）

7、和DAT(DA轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)的幾乎沒(méi)有親和力。在大鼠前額皮層粗制突觸體中，YL-0919強(qiáng)效抑制[3H]-5-HT的重?cái)z取，IC50為1.78nM;在穩(wěn)定表達(dá)人源SERT的HEK-293細(xì)胞系中，YL-0919同樣對(duì)[3H]-5-HT的重?cái)z取具有強(qiáng)效的抑制作用，IC50為1.93nM。并且YL-0919的5-HT重?cái)z取抑制作用強(qiáng)于臨床一線藥物氟西汀和度洛西汀。YL-0919在濃度為10μM時(shí)對(duì)D3、D2、D4、 D1、D5、5-HT1B、5

8、-HT1D、5-HT2A、5-HT2C、5-HT5A、5-HT6、α1A、α1B、α2A、 M1、M2、M3、 M4、M5等19種受體無(wú)親和力。這些結(jié)果提示YL-0919對(duì)5-HT1A和SERT具有高親和力和高選擇性結(jié)合，并且是強(qiáng)效的5-HT重?cái)z取抑制劑。
　　單次給予YL-0919（0.625-2.5mg/kg，i.g）能夠劑量依賴的顯著縮短小鼠懸尾和強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間。使用5-HT1A受體阻斷劑WAY-100635預(yù)處理能夠完全

9、阻斷YL-0919(2.5mg/kg，i.g)的抗抑郁活性。而5-HT2受體拮抗劑米安色林、5-HT3受體拮抗劑曲匹西隆、α2腎上腺素受體拮抗劑育亨賓對(duì)YL-0919的抗抑郁活性無(wú)阻斷作用。提示YL-0919急性給藥具有抗抑郁作用，并且與激動(dòng)5-HT1A受體有關(guān)，這與本實(shí)驗(yàn)室的其他研究一致。YL-0919亞慢性給藥(1.25-5mg/kg，i.g)在第2-5天顯著縮短獲得性無(wú)助小鼠逃避潛伏期及減少逃避失敗次數(shù)，表現(xiàn)出了顯著的抗抑郁活性。

10、單次或慢性給予大鼠YL-0919（0.625-2.5mg/kg，i.g）顯著縮短新奇抑制攝食潛伏期、增加大鼠在zero-迷宮開臂的停留時(shí)間和進(jìn)入開臂的次數(shù)、增加大鼠在高架十字迷宮進(jìn)入開臂次數(shù)百分比和在開臂停留時(shí)間百分比、增加電擊飲水次數(shù)，提示YL-0919單次或慢性給藥具有抗焦慮作用。慢性給予YL-0919(0.625-2.5mg/kg，i.g.)和維拉佐酮（1-4mg/kg，i.g.）均可顯著縮短新奇抑制攝食潛伏期，并都顯著縮短小鼠懸

11、尾、游泳不動(dòng)時(shí)間，提示YL-0919和維拉佐酮抗抑郁、抗焦慮活性相當(dāng)，但YL-0919的起效劑量較維拉佐酮小1-3倍。進(jìn)一步的受體后機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，在離體水平Y(jié)L-0919(10-9-10-5mol/L)與正常大鼠前額皮層突觸膜孵育，在1-10μM濃度時(shí)可顯著激活A(yù)C活性，表現(xiàn)出與陽(yáng)性藥氟西汀和丁螺環(huán)酮一致的作用。5-HT1A受體阻斷劑WAY-100635能顯著拮抗YL-0919對(duì)AC的激活作用。在整體水平，長(zhǎng)期反復(fù)給予YL-0919(1

12、.25-2.5mg/kg，i.g.)和維拉佐酮(4mg/kg，i.g.)均能增強(qiáng)小鼠海馬、前額皮層forskolin激活的AC活性，同時(shí)增強(qiáng)小鼠海馬PKA活性，并顯著上調(diào)小鼠海馬BDNF、p-CREB、p-ERK的表達(dá)。進(jìn)一步研究證實(shí)，腦室注射選擇性PKA阻斷劑H-89能完全阻斷單次給予YL-0919（2.5mg/kg，i.g.）在小鼠懸尾和小鼠強(qiáng)迫游泳模型上的抗抑郁活性。這些結(jié)果提示激活5-HT1A受體，并增強(qiáng)cAMP-CREB信號(hào)通

13、路的功能是YL-0919抗抑郁作用的重要機(jī)制之一。
　　結(jié)論:YL-0919與SERT蛋白和5-HT1A受體蛋白具有高親合活性并且這種結(jié)合具高選擇性;YL-0919具有強(qiáng)效的5-HT重?cái)z取抑制功能，并且強(qiáng)于一線藥物氟西汀和度洛西汀;YL-0919單次、亞慢性或慢性給藥在多種動(dòng)物模型上，表現(xiàn)出顯著的抗抑郁、抗焦慮作用;YL-0919具有與維拉佐酮相當(dāng)?shù)目挂钟?、抗焦慮活性，但起效劑量更低;激活5-HT1A受體功能，并增強(qiáng)前額皮層、海馬