山楂果肉原花青素的分離、鑒定與生物活性研究.pdf

1、山楂是一種在我國(guó)廣泛分布的薔薇科植物,是一種集食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及藥用價(jià)值為一身的保健水果,含有多種具有生理活性的化學(xué)成分,其中的原花青素具有很強(qiáng)的抗氧化性。原花青素(Proanthocyanidin,簡(jiǎn)稱(chēng)PC)是多酚類(lèi)物質(zhì),具有高度羥基化的結(jié)構(gòu),能夠起到抗氧化、清除自由基、抑菌等作用,有很好的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。
　　 (1)本研究首先測(cè)定山楂葉子與果肉中蛋白質(zhì)、總糖、總酸、總多酚、總黃酮和原花青素等主要化學(xué)成分的含量,并將不同品種山楂果

2、肉中原花青素的含量作一比較,結(jié)果表明山東平邑縣所產(chǎn)新品系“超金星”山楂果肉中原花青素的含量較高,很有研究意義,所以確定為實(shí)驗(yàn)材料。
　　 (2)對(duì)HSPC的提取工藝進(jìn)行了初步探討,通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn),在中心組合實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,運(yùn)用響應(yīng)面分析法得出了提取HSPC的最佳工藝組合:溫度80.66℃,時(shí)間90.17min,乙醇濃度68.11％,pH5,料液比1:12,提取2次。在此條件下HSPC的平均提取率可達(dá)95.9％。采用固相萃取的方法對(duì)山

3、楂果肉提取物中原花青素進(jìn)行了純化,產(chǎn)物純度為82.69％,原花青素的得率為3.36％；并采用乙酸乙酯萃取法和石油醚沉淀法進(jìn)一步對(duì)固相萃取后的HSPC粗提物(PC1)進(jìn)一步純化。結(jié)果表明,乙酸乙酯萃取和石油醚沉淀的分離效果明顯,并由此得到了四種不同類(lèi)型的HSPC提取物,即乙酸乙酯萃取物、乙酸乙酯萃取水相提取物、石油醚沉淀物和石油醚沉淀水相提取物。乙酸乙酯萃取物(PC2)純度達(dá)75.31％,得率為1.98‰乙酸乙酯萃取水相提取物(PC3)純

4、度達(dá)81.22％,得率為1.63％；石油醚沉淀水相提取物(PC4)純度達(dá)82.19％,得率為2.98％；石油醚沉淀物(PC5)純度達(dá)62.13％,得率為0.42％。
　　 (3)通過(guò)對(duì)五種不同類(lèi)型HSPC進(jìn)行的UV、IR光譜分析,通過(guò)UV光譜圖,可以確定HSPC的特征吸收峰在280nm處,與葡萄籽原花青素標(biāo)品的UV光譜吸收一致；通過(guò)IR光譜圖,證實(shí)了HSPC的基本骨架結(jié)構(gòu),與葡萄籽原花青素標(biāo)品結(jié)果基本一致。綜上所述,可以初步判斷

5、HSPC各提取物中的主要成分為不同聚合度的原花青素混合物。
　　 通過(guò)對(duì)五種不同類(lèi)型HSPC進(jìn)行的HPLC色譜分析,參照標(biāo)品HPLC色譜圖,可以得出山楂果肉中含有山楂果肉中含有多種原花青素低聚體,且乙酸乙酯萃取對(duì)HSPC粗提物的分離效果要優(yōu)于石油醚沉淀,乙酸乙酯萃取相能夠集中大部分的原花青素低聚體。HPLC-MS進(jìn)一步證實(shí)了乙酸乙酯萃取相HSPC含有多種原花青素單體和低聚體,具有開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。通過(guò)對(duì)乙酸乙酯萃取物酸水解產(chǎn)物的高效

6、液相色譜分析,證明山楂果肉中原花青素聚合體末端單元由(-)-Epicatechin組成。
　　 (4)通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究了不同提取物的油脂抗氧化、清除自由基活性和抑菌活性。
　　 ①油脂抗氧化結(jié)果表明山楂果肉PC具有較強(qiáng)的抗氧化能力,0.04％原花青素的抗氧化活性與0.02％BHT的抗氧化效果相近,0.02％原花青素的抗氧化活性?xún)?yōu)于0.02％茶多酚、0.02％Vc、0.02％檸檬酸和0.02％酒石酸,Vc、檸檬酸、酒石酸對(duì)

7、原花青素的抗氧化作用均有不同程度的協(xié)同效應(yīng)。
　　 ②化學(xué)發(fā)光法測(cè)定山楂果肉原花青素乙酸乙酯萃取物的體外抗氧化活性及其對(duì)DNA損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明,當(dāng)HSPC濃度為1mg/mL時(shí),對(duì)超氧陰離子抑制率達(dá)87.7％,其半數(shù)抑制率濃度IC50值為130.8μg/mL;100μg/mL時(shí)對(duì)羥基自由基抑制率達(dá)91.7％,IC50值為61.72μg/mL；8μg/mL時(shí)對(duì)雙氧水抑制率達(dá)91.6％,IC50值為0.19μg/mL;40μg

8、/mL時(shí)對(duì)體外DNA損傷抑制率達(dá)80.7％,IC50值為22.16μg/mL。表明HSPC具有很好的體外清除活性氧和保護(hù)DNA損傷的活性。
　　 ③抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:各產(chǎn)物對(duì)細(xì)菌都有不同程度的抑制作用,其中對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制效果最好,而對(duì)霉菌和酵母菌幾乎無(wú)抑制作用。各級(jí)分之間相比,其中PC1、PC2和PC4對(duì)細(xì)菌的抑制效果較好,這可能與各產(chǎn)物的成分有關(guān)。溫度和pH值對(duì)抑菌活性有較大影響,低溫處理和微堿性條件有利于抑菌活性的發(fā)