葡萄原花青素研究及其ANR基因的克隆.pdf

1、原花青素(proanthocyanidin，PC)，又稱縮合單寧，屬類黃酮類物質(zhì)，具有抗氧化、抗腫瘤等一系列生物活性。作為世界最受歡迎的十大植物藥之一，原花青素己被廣泛的應(yīng)用于藥品、保健品和化妝品等。 葡萄中含有豐富的原花青素，本研究對32個葡萄品種的葡萄籽和葡萄皮的原花青素含量進(jìn)行了測定。結(jié)果表明：不同葡萄品種的原花青素含量差異顯著，葡萄籽原花青素含量最高的為21.27％，最低為0.33％；葡萄皮原花青素最高為8.09％，最低

2、為0.09％。 本研究選取了原花青素含量差異較顯著的兩個葡萄品種(4號、21號)，提取其葡萄籽和皮的低聚原花青素，測定提取物的純度及聚合度，并進(jìn)行小鼠體內(nèi)抗氧化試驗。結(jié)果表明：葡萄籽原花青素提取物的抗氧化效果總體比葡萄皮的高；葡萄籽原花青素提取物在小鼠體內(nèi)有顯著抗氧化效果；葡萄皮原花青素提取物的抗氧化效果不顯著；兩個葡萄品種的原花青素提取物在小鼠體內(nèi)抗氧化效果無顯著差異。 本研究以高原花青素葡萄品種“BR”的葉片為材料，

3、用同源克隆的方法克隆了原花青素合成關(guān)鍵酶花青素還原酶(anthocyanidin reductase，ANR)基因的開放閱讀框。結(jié)果得到1017 bp的核苷酸序列，它與葡萄(Vitis vinifera)、茶樹(Camellia sinensis)ANR基因的同源性分別為99％、95％。 本研究將獲得的開放閱讀框與原核表達(dá)載體pET-28a構(gòu)建成重組子pET-28a-ANR，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21。SDS-PAGE電泳結(jié)果表明該