茄子花青素合成相關基因SmMYB的克隆與功能研究.pdf

1、茄子(Solanum melongena L.)是為數(shù)不多富含花青素的蔬菜作物之一?；ㄇ嗨厥且环N廣泛存在于植物中的天然色素,具有很好的抗氧化性,在藥品、保健品等方面得到了廣泛應用,具有很好的市場前景。然而對茄子花青素合成研究還集中于抗氧化性評價及關鍵酶基因篩選,對轉錄因子的基因克隆及調控機制研究尚未見報道。
　　本研究主要內容包括：⑴選用表型有明顯差異的茄子種質資源作材料。?YZ14?表型為無刺、紫莖、紫花、紫果;?YZ3?表型為

2、有刺、綠莖、白花、白果。采用同源克隆與RACE(rapid amplification of cDNA ends)相結合的方法克隆了茄子MYB基因cDNA及gDNA全長序列,命名為SmMYB。⑵SmMYB基因cDNA全長1035bp,開放閱讀框從第69bp-905bp處共837個核苷酸,編碼278個氨基酸。氨基酸序列比對結果表明, SmMYB與辣椒(Capsicum annuum L.)MYB轉錄因子氨基酸序列相似性達71％。預測成熟蛋

3、白的等電點為8.47,具有2個典型的DNA-binding結構域且亞細胞定位于細胞核,為典型的R2R3MYB轉錄因子。gDNA全長3834bp,包含3個外顯子及2個內含子。⑶用打孔法及削皮法采集茄子果皮,進行花青素含量測定,對重復實驗結果進行分析,發(fā)現(xiàn)削皮法采集的果皮花青素含量測定值更高,且數(shù)據(jù)方差相對較小,認為削皮法更適合茄子果皮取樣。⑷對茄子根、莖表皮、嫩葉、花瓣、果皮組織進行花青素含量測定,檢測結果顯示,紫茄果皮花青素合成量顯著高

4、于紫茄其他組織及白茄各組織。熒光半定量PCR檢測結果表明,SmMYB基因表達水平具有組織特異性,在紫茄果皮中表達水平顯著高于紫茄其他組織及白茄各組織,認為 SmMYB與茄子花青素合成相關。此外,該基因在白茄各組織中亦有低量表達,推測與SmMYB的表達模式有關。⑸對紫茄進行不同程度的遮光處理后,分別檢測果皮中花青素含量及SmMYB、SmDFR基因表達水平。結果表明,遮光處理顯著抑制紫茄果皮花青素合成及基因表達,且三者變化趨勢相似。進一步驗