葡萄花青素還原酶基因遺傳轉(zhuǎn)化水稻的研究.pdf

1、原花青素(proanthocyanidin,PC),又稱縮合單寧,為多酚類聚合物,具有極強(qiáng)的抗氧化活性,其清除自由基的能力是Vc的20倍、VE的50倍。原花青素作為世界上最受歡迎的十大植物藥之一,已被廣泛應(yīng)用于藥品和化妝品等。
　　 水稻具有與葡萄相似的代謝途徑,含有共同的前體物質(zhì)--花青素,葡萄中的花青素經(jīng)花青素還原酶(ANR)的催化合成原花青素,但水稻中沒有ANR。本研究采用基因工程技術(shù),將來(lái)自于葡萄的花青素還原酶(ANR)

2、基因?qū)胨局?使其在水稻的胚和糊粉層中特異性高效表達(dá),有望創(chuàng)制出稻米中含有原花青素的功能稻新種質(zhì),從而達(dá)到改良稻米保健品質(zhì)的目的。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、ANR基因雙T-DNA植物表達(dá)載體的構(gòu)建:構(gòu)建了含有ANR基因的雙T-DNA植物表達(dá)載體pCDMAR-ANR-Hyg,該載體含有兩段獨(dú)立的T-DNA區(qū),其中一個(gè)T-DNA區(qū)含有選擇標(biāo)記基因(Hyg),另外一個(gè)T-DNA區(qū)含有ANR基因,選用的啟動(dòng)子是油膜蛋白Oleosi

3、n啟動(dòng)子,且在ANR基因表達(dá)框的兩側(cè)連有兩段正向重復(fù)的煙草Rb7MARs序列,以增強(qiáng)ANR基因的表達(dá)。
　　 2、轉(zhuǎn)ANR基因水稻植株的獲得:采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法,將重組表達(dá)載體pCDMAR-ANR-Hyg導(dǎo)入到水稻品種“臺(tái)粳9號(hào)”中,獲得5株轉(zhuǎn)基因植株,經(jīng)PCR檢測(cè)其中2株呈陽(yáng)性。
　　 3、黑米遺傳轉(zhuǎn)化體系的初步研究:以實(shí)驗(yàn)室原有的再生體系為基礎(chǔ),比較分析了不同黑米品種、不同消毒方式和不同培養(yǎng)基等因素對(duì)黑米的愈傷誘導(dǎo)