2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:了解H3K27me3在HGF、FGF4誘導(dǎo)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mBM-MSCs)定向分化肝細(xì)胞中的作用及其分子機制。方法:①全骨髓差異貼壁法分離培養(yǎng)獲得P3-P6代mBM-MSCs,添加HGF、FGF4培養(yǎng)7d后,Real time PCR檢測AFP、Foxa2、Jmjd3表達水平,Western blot檢測H3K27m3、P-P38和P-AERK1/2表達水平,ChIP檢測AFP、Foxa2基因啟動子區(qū)H3K27m3和Jmj

2、d3結(jié)合水平,以未誘導(dǎo)0d組為對照。②將生長旺盛BM-MSCs細(xì)胞隨機分五組:空白對照組、P38抑制劑組、ERK1/2抑制劑組、MSK1抑制劑組和細(xì)胞因子誘導(dǎo)組,Western blot檢測AFP、Foxa、P-P38、P-ERK1/2和P-MSK1表達水平,Real time PCR檢測AFP和Foxa2表達水平。③將三種Jmjd3慢病毒干擾載體以最佳MOI轉(zhuǎn)染mBM-MSCs,并設(shè)空白對照組和陰性對照組,24h后檢測Jmjd3 mR

3、NA表達水平以驗證其沉默效果;將生長旺盛的P3-P5代BM-MSCs細(xì)胞隨機分四組:空白對照組、細(xì)胞因子誘導(dǎo)組、eGFP處理組和Jmjd3-shRNA1干擾組,培養(yǎng)24 h添加HGF、FGF4進行培養(yǎng),7d后檢測各組Jmjd3、AFP和Foxa2表達水平及AFP和Foxa2基因啟動子區(qū)H3K27m3和Jmjd3結(jié)合水平。結(jié)果:①誘導(dǎo)7d后,大部分BM-MSCs細(xì)胞形態(tài)與小鼠肝實質(zhì)細(xì)胞相似; AFP、Foxa2和Jmjd3 mRNA和蛋白

4、的表達水平均明顯升高(p<0.05),而H3K27m3的蛋白表達明顯下降,同時檢測到7d時P-P38、P-ERK1/2的蛋白表達明顯升高;AFP、Foxa2啟動子區(qū)上H3K27me3表達水平明顯下降,但其啟動子區(qū)Jmjd3表達水平明顯上升(p<0.05)。②與細(xì)胞因子誘導(dǎo)組相比,經(jīng)P38和ERK1/2通路抑制劑處理后,BM-MSCs細(xì)胞中的p-MSK1、AFP和Foxa2蛋白表達明顯下降;并證實經(jīng)MSK1通路抑制劑處理BM-MSCs中A

5、FP和Foxa2蛋白表達;P38抑制劑組和MSK1抑制劑組均可極顯著下調(diào)AFP和Foxa2的mRNA表達水平(P<0.01),ERK1/2抑制劑組可顯著下調(diào)AFP和Foxa2的mRNA表達(P<0.05)。③與eGFP處理組相比,三個干擾組都能降低BM-MSCs細(xì)胞中的Jmjd3mRNA表達水平,抑制效率分別為81.3%51.7%和41.4%;且AFP、Foxa2和BRG1mRNA表達顯著下降(P<0.01);Jmjd3-shRNA1干

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