組蛋白甲基化修飾相關(guān)蛋白調(diào)控腫瘤表型的機(jī)制研究.pdf

1、肝癌是嚴(yán)重影響人類生命健康的癌癥之一，其發(fā)病率和致死率逐年提高。然而，對于肝癌發(fā)生的精確分子機(jī)制目前尚不清楚。組蛋白甲基化修飾作為重要的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控形式，在腫瘤發(fā)生發(fā)展及表型調(diào)控中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。最近的研究報(bào)道肝癌中EZH2的表達(dá)水平和H3K27me3修飾水平升高，部分通過表觀遺傳沉默抑癌的miRNA來促進(jìn)肝癌的惡性表型。然而在HCC發(fā)病中PcG關(guān)鍵作用仍在探索中，PcG調(diào)控的靶基因網(wǎng)絡(luò)尚不清楚。先前發(fā)現(xiàn)HCC中menin-ML

2、L復(fù)合物表達(dá)上調(diào)，該復(fù)合物調(diào)控的H3K4me3組蛋白修飾參與促進(jìn)HCC（未發(fā)表數(shù)據(jù)）。PcG復(fù)合物調(diào)控的H3K27me3異常促進(jìn)肝癌發(fā)生。激活型的H3K4me3和抑制型的H3K27me3對肝癌均起促進(jìn)作用，然而，在肝癌發(fā)生過程中，兩種正負(fù)性組蛋白甲基化修飾間的關(guān)系尚不清楚。
　　 本論文研究發(fā)現(xiàn)肝癌中PcG復(fù)合物的表達(dá)上調(diào)并與預(yù)后不良密切聯(lián)系在一起。PcG成員分別shRNA干擾抑制肝癌細(xì)胞中總的H3K27me3水平、抑制肝癌細(xì)胞

3、增殖及荷瘤生長。結(jié)果提示，通過ChIP-on-Chip、表達(dá)譜芯片等組學(xué)技術(shù)篩選了PcG調(diào)控的關(guān)鍵分子網(wǎng)絡(luò)。ChIP檢測發(fā)現(xiàn)FOXO3等靶基因也受到PcG介導(dǎo)的H3K27me3調(diào)控，而PcG抑制P53基因轉(zhuǎn)錄可能通過H3K27me3非依賴性方式實(shí)現(xiàn)。H3K27me3與H3K4me3ChIP-on-Chip結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，在肝癌中H3K27me3與H3K4me3分別相對獨(dú)立地參與靶基因調(diào)控，如腫瘤中H3K27me3增高的靶基因啟動(dòng)子位點(diǎn)的H

4、3K4me3不發(fā)生明顯變化，而H3K4me3增高的基因啟動(dòng)子位點(diǎn)的H3K27me3則不發(fā)生改變。多種組蛋白甲基化機(jī)制共同促進(jìn)HCC發(fā)生，又相對獨(dú)立地發(fā)揮各自功能，如H3K27主要抑制抑癌基因(如CDKN2A)表達(dá)，H3K4me3主要針對Yap1等原癌基因發(fā)揮促進(jìn)作用。發(fā)現(xiàn)特異的抑制EZH2酶活性的小分子抑制劑GSK12610uM處理HepG2明顯上調(diào)受PcG沉默的靶基因CDKN2A、FOXO3、E2F1和NOTCH2?？寺⌒纬山Y(jié)果顯示，