疏肝解郁法對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征大鼠模型的影響及其分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探討疏肝法治療圍絕經(jīng)期綜合征(PMS)大鼠模型的生物學(xué)基礎(chǔ)，闡明肝郁在圍絕經(jīng)期綜合征發(fā)病過程中的意義。探討補(bǔ)腎法治療圍絕經(jīng)期綜合征的生物學(xué)基礎(chǔ)，揭示自然衰老過程中腎虛對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征發(fā)病的意義。從大鼠海馬Raf/MEK/ERK通路基因及蛋白的變化，探討該信號(hào)通路在圍絕經(jīng)期綜合征肝郁證的分子機(jī)制。
　　方法：
　　選擇13月齡SD大鼠，自然衰老和慢性束縛法建立肝郁證大鼠模型，分為肝郁證模型組、柴胡疏肝散組及丹

2、梔逍遙散組;自然衰老法建立圍絕經(jīng)期綜合征大鼠模型，分為圍絕經(jīng)期綜合征模型組、左歸丸組、右歸丸組;3月齡育齡期大鼠為正常對(duì)照組，4種中藥復(fù)方分別干預(yù)3周。采用Open-Field-Test進(jìn)行行為學(xué)觀察;放射性免疫技術(shù)檢測外周血E2、FSH、LH;采用ELISA檢測外周血、海馬神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、NE、beta-ep及外周血GnRH、ACTH、Corticosterone、CRH含量;以實(shí)時(shí)定量PCR法檢測卵巢ER alpha，ER be(

3、i)a，LHR、FSHR mRNA表達(dá)。采用HE染色及透射電鏡技術(shù)，觀察正常對(duì)照組、肝郁證模型組、柴胡疏肝散組海馬的形態(tài)結(jié)構(gòu);以實(shí)時(shí)定量PCR法檢測海馬raf1、MEK1/2、ERK1/2的表達(dá);蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測海馬raf1、MEK1/2、ERK1/2總蛋白及磷酸化蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　(1)與肝郁證模型組相比，柴胡疏肝散組、丹梔逍遙散組大鼠無論是水平運(yùn)動(dòng)得分還是垂直運(yùn)動(dòng)得分均出現(xiàn)了顯著性提高(p＜0.05)。柴胡

4、疏肝散組、丹梔逍遙散組E2沒有顯著變化(p＞0.05);柴胡疏肝散組血清FSH出現(xiàn)了顯著性降低(p＜0.01);而丹梔逍遙散組血清LH顯著性降低(p＜0.01)。柴胡疏肝散組血清GnRH、Corticosterone、CRH均出現(xiàn)了顯著性降低(p＜0.05);丹梔逍遙散組只有GnRH顯著性下降。與肝郁證模型組相比，柴胡疏肝散組、丹梔逍遙散組血清5-HT、beta-ep含量顯著下降，而柴胡疏肝散組NE的含量提高。肝郁證模型組下丘腦5-HT

5、、NE、beta-ep含量顯著降低，經(jīng)給藥后，柴胡疏肝散組下丘腦5-HT、NE、beta-ep含量均顯著提高，而丹梔逍遙散組只有beta-ep顯著提高。與模型組相比，柴胡疏肝散組ER alpha mRNA表達(dá)顯著性升高(P＜0.01)。柴胡疏肝散組、丹梔逍遙散組ER beta mRNA表達(dá)同樣降低，但與肝郁證模型組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(2)經(jīng)過21d給藥后，與PMS模型組相比，右歸丸組水平運(yùn)動(dòng)得分更高(p＜0.05);左

6、歸丸組、右歸丸組垂直運(yùn)動(dòng)得分顯著降低(p＜0.05)。與PMS模型組相比，左歸丸組、右歸丸組大鼠外周血血清E2均出現(xiàn)明顯上升，F(xiàn)SH、LH出現(xiàn)顯著性下降(p＜0.05)。與正常對(duì)照組相比，PMS模型組GnRH、ACTH、Corticosterone、CRH均顯著性提高;右歸丸組大鼠外周血血清GnRH、ACTH出現(xiàn)顯著性下降（p均小于0.05）;左歸丸組則沒有明顯變化;與PMS模型組相比，左歸丸組血清5-HT、NE均出現(xiàn)下降;右歸丸組血清

7、5-HT、NE、beta-ep含量下降。與正常對(duì)照組相比，PMS模型組大鼠下丘腦5-HT、NE、beta-ep含量顯著降低。經(jīng)給藥后，左歸丸組NE、beta-ep含量均顯著提高，而右歸丸組則沒有明顯變化。與PMS模型組相比，左歸丸組ER alpha mRNA表達(dá)升高（P＜0.01）;左歸丸組、右歸丸組ER beta mRNA表達(dá)都降低（P＜0.01）。
　　(3)海馬的超微結(jié)構(gòu)顯示:肝郁證模型組神經(jīng)元細(xì)胞線粒體數(shù)目較少，核膜結(jié)構(gòu)不

8、完整;柴胡疏肝散組神經(jīng)元細(xì)胞核排列整齊，核膜較完整，線粒體數(shù)目較少。定量PCR結(jié)果顯示，肝郁證模型組Mek2及Erk2 mRNA表達(dá)降低，經(jīng)過柴胡疏肝散灌胃給藥21d后，柴胡疏肝散組Mek2及Erk2 mRNA表達(dá)提高。蛋白質(zhì)印跡技術(shù)結(jié)果表明，raf1，MEK1/2，ERK1/2總蛋白在3組大鼠海馬中沒有顯著性差異(p＞0.05);p-raf1，p-MEK1/2，p-ERK1/2三種磷酸化蛋白在肝郁模型組中表達(dá)均下調(diào)，而經(jīng)過21d柴胡疏

9、肝散灌胃給藥后，這些蛋白表達(dá)水平都顯著性提高(p＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　(1)自然衰老的圍絕經(jīng)期綜合征大鼠模型具有腎虛的病理特點(diǎn)。補(bǔ)腎法對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征大鼠模型的激素、激素受體及神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)起到一定的調(diào)節(jié)作用。
　　(2)疏肝法主要通過下丘腦-垂體-腎上腺軸調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)來治療圍絕經(jīng)期綜合征;補(bǔ)腎法主要通過提高外周血雌激素水平，進(jìn)而影響單胺類神經(jīng)遞質(zhì)達(dá)到治療圍絕經(jīng)期綜合征的目的。
　　(3)圍絕經(jīng)期