1,25(OH)2D3在潰瘍性結(jié)腸炎中治療效應(yīng)及作用機制的實驗研究.pdf

1、目的：初步探討1,25-二羥維生素D3[1,25(OH)2D3]在葡聚糖硫酸鈉(dextran sulfate sodium, DSS)誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis, UC)中的治療效應(yīng)及作用機制。
　　方法：30只BALB/c小鼠按隨機數(shù)字表分為：A組(對照組，n=6)、B組(模型組，n=6)、C組(低劑量1,25(OH)2D3干預(yù)組，n=6)、D組(中劑量1,25(OH)2D3干預(yù)組，n=6)、

2、E組(高劑量1,25(OH)2D3干預(yù)組，n=6)。A組小鼠自由飲用蒸餾水7天；B、C、D、E組小鼠自由飲用5%DSS溶液7天以制成小鼠UC模型；造模的同時于第1、3、5及7天分別給以C、D、E組小鼠低劑量(50ng/只)、中劑量(100ng/只)、高劑量(200ng/只)1,25(OH)2D3腹腔內(nèi)注射，A、B組予腹腔注射溶藥載體無菌大豆油作為對照。于造模第8天，處死所有各組小鼠。大體觀察各組小鼠疾病活動指數(shù)(disease acti

3、vity index, DAI)，常規(guī)病理切片評估結(jié)腸組織病理學(xué)評分(histopathological score, HPS)。反轉(zhuǎn)錄(RT)-PCR測定各組小鼠遠端結(jié)腸中IFN-γ、IL-17和IL-21 mRNA的表達，流式細胞儀(flow cytometer, FCM)測定各組小鼠脾臟淋巴細胞中IFN-γ、IL-17和IL-21的表達，免疫組化(immunohistochemistry, IH)測定各組小鼠遠端結(jié)腸中IFN-γ、

4、IL-17和IL-21蛋白水平的表達。各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差( x±s)表示，組間比較用LSD-t(方差齊)或Tamhane(方差不齊)檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：(1)與對照組DAI(0.33±0.52)和HPS(0.17±0.41)相比，模型組小鼠DAI(7.33±1.03)和HPS(12.00±0.63)明顯增高(P<0.01)；與模型組相比，1,25(OH)2D3干預(yù)后C、D、E組DAI(分別為2.8

5、3±0.40、2.83±0.75、2.33±0.52)和HPS(分別為10.83±0.98、7.50±0.84、6.67±0.52)均有不同程度的下降(P<0.01)；(2)模型組IFN-γmRNA、IL-17 mRNA、IL-21 mRNA表達量(分別為3.11±0.24、1.38±0.38、3.32±0.16)明顯高于對照組(分別為1.38±0.16、0.52±0.15、1.47±0.19)(P<0.01)，1,25(OH)2D3干

6、預(yù)后，IFN-γmRNA、IL-17 mRNA、IL-21 mRNA表達在 C組(分別為2.48±0.21、0.75±0.14、0.72±0.19)、D組(分別為2.02±0.22、0.56±0.16、0.73±0.16)和E組(分別為2.00±0.20、0.53±0.19、0.76±0.09)均顯著下降(P<0.01)。對照組小鼠脾臟淋巴細胞中IFN-γ、IL-17的表達比例分別為(44.12±3.89)%、(20.03±5.20)%

7、，模型組小鼠脾臟淋巴細胞中IFN-γ、IL-17的表達比例分別為(58.98±3.96)%、(44.97±8.76)%，模型組小鼠脾臟淋巴細胞中IFN-γ、IL-17的表達比例與對照組相比明顯升高(P<0.01)；1,25(OH)2D3干預(yù)后C、D、E組小鼠脾臟淋巴細胞中IFN-γ、IL-17的表達比例分別為 C組(44.95±5.88)%、(37.75±6.75)%、D組(36.67±3.58)%、(30.93±3.18)%、E組(4

8、7.55±4.13)%、(47.43±2.39)%，與模型組相比干預(yù)組均有明顯降低(P<0.01)；模型組 IL-21的表達比例(52.47±2.50)%較對照組(47.82±5.00)%明顯升高(P<0.01)，1,25(OH)2D3干預(yù)后C、D、E組IL-21的表達比例分別為(55.38±1.79)%、(53.80±1.47)%、(53.53±3.86)%，與模型組比較均無明顯差異(P>0.05)。免疫組化實驗結(jié)果表明，模型組IFN

9、-γ、IL-17、IL-21的蛋白表達(分別為548.33±36.25、121.48±12.34、221.89±31.52)明顯高于對照組(分別為76.68±14.19、31.89±4.19、90.36±7.30)(P<0.01)，1,25(OH)2D3干預(yù)后IFN-γ、IL-17、IL-21的蛋白表達在C組(分別為252.82±32.06、141.72±21.07、171.70±17.12)、D組(分別為76.86±4.48、47.0

10、0±6.64、37.54±5.36)和E組(分別為157.05±8.36、135.08±14.45、94.09±4.14)較模型組均明顯降低(P<0.01)。
　　結(jié)論：(1)1,25(OH)2D3干預(yù)的UC小鼠模型大體癥狀可明顯好轉(zhuǎn)，遠端結(jié)腸炎癥程度亦得到明顯減輕；(2)UC小鼠遠端結(jié)腸及脾臟淋巴細胞中IFN-γ、IL-17和IL-21的表達水平均明顯升高，提示T細胞亞型Th1細胞、Th17細胞在UC發(fā)病中可能發(fā)揮重要作用；(3