IGFBP5在骨肉瘤生長與轉移作用機理的研究.pdf

1、目的：熒光素酶標記腫瘤細胞株MG63，通過肺轉移灶原代培養(yǎng)的方法建立MG63細胞株轉移亞型細胞株MG63-1和MG63-2。 方法：體外培養(yǎng)腫瘤細胞株MG63細胞株，熒光素酶標記細胞，通過膝關節(jié)注射腫瘤細胞建立腫瘤模型，5周左右，當熒光成像儀掃描發(fā)現(xiàn)肺臟廣泛轉移時，取肺臟轉移腫瘤，原代培養(yǎng)得細胞株MG63-1，重復上述操作得細胞株MG63-2。 結果：（1）利用BSD篩選方法成功篩選到含熒光素酶的細胞株MG63-luc（

2、2）成功將篩選到的細胞株MG63-luc注射到4周齡裸鼠成瘤，并得到腫瘤轉移細胞亞型MG63-1和MG63-2。 結論：成功得到含有熒光素酶標記的細胞株MG63-luc及其轉移亞型MG63-1和MG63-2，為進一步研究骨肉瘤轉移打下了良好的基礎。 目的：通過一系列的腫瘤細胞經典轉移能力方法，體外體內實驗比較MG63和MG63-2細胞株之間腫瘤轉移能力，證實MG62-2較MG63的轉移能力強。 方法：繪制細胞生長

3、曲線，劃痕實驗，細胞吸附實驗，細胞Matrigel遷移實驗，與轉移相關的主要5個基因MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2和Ezrin的RT-PCR及western-blotting。 結果：（1）MG63-2的生長較MG63生長緩慢，細胞的周期長。（2）MG63-2劃痕實驗細胞的融合較MG63慢，所需時間長。（3）細胞吸附實驗證實MG63-2的細胞吸附能力較MG63強。（4）Matrigel遷移實驗證實MG63-2的遷移能

4、力較MG63強。（5）RT-PCR以及western-blotting均證實MMP2和MMP9表達降低，TIMP2和Ezrin表達增高。 結論：通過繪制細胞生長曲線，劃痕實驗，細胞吸附實驗、Matrigel遷移實驗，與轉移相關的主要七個基因MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2和Ezrin的RT-PCR及其western-blotting，有差異表達，證實MG63-2較MG63在體外有著較強的轉移能力，為下一步研究打下堅實之

5、基礎。 目的：本研究旨在通過膝關節(jié)注射動物腫瘤模型觀察MG63和MG63-2之間腫瘤生長及轉移能力的區(qū)別。 方法：將MG63細胞和MG63-2細胞株的PBS細胞懸液注射入裸鼠膝關節(jié)內。熒光素酶成像儀器觀察裸鼠原位腫瘤生長情況和肺轉移情況。石蠟組織切片證實MG63-2在肺部有廣泛的轉移灶。 結果：（1）采用膝關節(jié)注射法成原位腫瘤法穩(wěn)定可靠；（2）原位腫瘤的生長曲線證實MG63腫瘤組成瘤性較MG63-2生長慢。（3）

6、熒光素酶成像儀觀察結果顯示MG63-2的成瘤性較強，且其肺臟內轉移多而廣泛，有明顯的統(tǒng)計學意義。（4）組織學HE染色，光鏡下計數(shù)腫瘤轉移數(shù)量，MG63-2有較強的轉移能力。 結論：體內實驗證實MG63-2較MG63細胞株有較強的細胞成瘤性和轉移能力。 目的：通過構建IGFBP5基因高表達和IGFBP5 RNA干擾腺病毒，重點研究IGFBP5在腫瘤生長其轉移的作用。 方法：構建IGFBP5的腺病毒載體和IGFBP5

7、的干擾病毒，分別感染Mefs、C3H10和C2C12三類細胞株，觀測ALP讀數(shù)，分析研究IGFBP5對其分化的影響。病毒感染143B、MG63-P、MG63-1、MG63-2細胞株繪制生長曲線，采用matrigel遷移實驗分析IGFBP5對骨肉瘤細胞株的遷移能力的影響。游標卡尺及Xenogen image成像技術分析IGFBP5高表達和低表達后，腫瘤在動物體內生長與轉移情況，分析其對腫瘤生長與轉移的影響，石蠟組織切片，光鏡下看轉移灶的情

8、況，研究IGFBP5對腫瘤轉移的影響。 結果：（1）ALP讀數(shù)證實IGFBP5能促進C3H10、mefs、C2C12的分化，但是抑制其增長。而對SiIGFBP5則促進增長影響分化。（2）IGFBP5能抑制骨肉瘤143B-luc、MG63、MG63-1、Mg63-2的增長，SiIGFBP5則促進其增長。（3）劃痕實驗、matrigel腫瘤遷移實驗，證實IGFBP5抑制腫瘤的遷移能力。（4）體內腫瘤生長的測量及其成像均證實IGFBP