電磁脈沖對T淋巴細(xì)胞的影響及機(jī)制.pdf

1、電磁脈沖（Electromagneticpulse,EMP）作為一種特殊的高能復(fù)合電磁波，應(yīng)用領(lǐng)域不斷擴(kuò)展，其生物學(xué)效應(yīng)和相關(guān)的作用機(jī)制已經(jīng)成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)之一。免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵御外來侵襲和損傷的主要防御體系，通過抗原的識別和應(yīng)答，免疫防御、免疫監(jiān)視和免疫自穩(wěn)等機(jī)制維持機(jī)體的穩(wěn)態(tài)。因此研究電磁輻射對免疫系統(tǒng)的作用具有重要的意義。既往研究發(fā)現(xiàn)，電磁輻射對各種免疫細(xì)胞的增殖和凋亡和功能有不同程度的影響。目前有關(guān)電磁脈沖對T淋巴細(xì)胞作

2、用的相關(guān)研究報道不多。
　　目的：探討電磁脈沖對T淋巴細(xì)胞的影響及機(jī)制。
　　方法：
　　一、在體實(shí)驗(yàn)
　　選用電磁脈沖輻射源(場強(qiáng)200kV/m,脈沖前沿3.5ns，脈寬14ns，重復(fù)頻率1Hz)對雄性BALB/c小鼠進(jìn)行輻照，每天照射400次，連續(xù)照射7天，于照后不同時間處死小鼠觀察以下指標(biāo)：
　　1.取胸腺和脾臟，用HE染色法觀察其組織形態(tài)的改變；
　　2.處死前稱取小鼠的體重、處死后對胸腺和脾

3、臟進(jìn)行稱重，計算胸腺、脾臟指數(shù)；提取胸腺和脾臟淋巴細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，觀察淋巴細(xì)胞數(shù)量的變化；
　　3.通過流式細(xì)胞儀檢測脾臟淋巴細(xì)胞中的T、B淋巴細(xì)胞比例的變化；
　　4.通過流式細(xì)胞儀檢測脾臟淋巴細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞周期的改變；
　　5.通過Migrationassay實(shí)驗(yàn)法檢測EMP照射不同次數(shù)（0次、100次、200次、400次），照后不同時間（1、3、7、14、28天），脾臟淋巴細(xì)胞遷移能力的變化；
　　6.通過

4、ELISA法檢測脾臟組織液中的SDF-1的表達(dá)水平；
　　7.通過Westernblotting實(shí)驗(yàn)檢測脾臟淋巴細(xì)胞p-AKT的表達(dá)水平。
　　二、離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
　　用相同的EMP源輻照J(rèn)urkatT細(xì)胞，觀察以下指標(biāo)：
　　1.EMP照射0次（對照組）、100次、200次、400次；照后0h（對照組）、1h、3h、6h、12h、24h,通過Migrationassay檢測JurkatT細(xì)胞遷移能力的變化；

5、>　　2.用流式細(xì)胞儀檢測EMP照后JurkatT細(xì)胞膜上CXCR4的表達(dá)水平的改變；
　　3.用Westernblotting法檢測JurkatT細(xì)胞PI3K、p-AKT、PAK1、Rac1表達(dá)水平的變化。
　　4.采用ELISA方法檢測JurkatT細(xì)胞IL-4和IFN-γ表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:
　　1.BALB/c小鼠在EMP輻照后，（1）胸腺結(jié)構(gòu)沒有顯著的變化；輻照3天后，脾臟血竇擴(kuò)張，充血明顯，脾

6、小體結(jié)構(gòu)不清；（2）胸腺指數(shù)變化沒有統(tǒng)計學(xué)意義；脾臟指數(shù)呈現(xiàn)先增后減的趨勢，在照后第3、7天輻照組的脾臟指數(shù)高于對照組；胸腺淋巴細(xì)胞數(shù)的變化與對照組沒有顯著差異；脾臟淋巴細(xì)胞數(shù)在照后第3和7天，輻照組淋巴細(xì)胞數(shù)多于對照組；（3）輻照組脾臟中的T淋巴細(xì)胞數(shù)與對照組相比顯著增加，B淋巴細(xì)胞數(shù)改變不顯著；（4）輻照組和對照組脾臟淋巴細(xì)胞的凋亡數(shù)量和細(xì)胞周期的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義；（5）400次EMP輻照組的淋巴細(xì)胞的遷移能力與對照組相比明顯增加

7、，照后1、3、7天脾臟淋巴細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)；（6）EMP輻照后脾臟中的SDF-1表達(dá)量升高；（7）脾臟淋巴細(xì)胞的p-AKT的表達(dá)也相應(yīng)的增加。
　　2.JurkatT細(xì)胞在EMP輻照后，（1）200次EMP輻照組的細(xì)胞遷移能力增加顯著；照后1h、3h、6h的細(xì)胞趨化能力與對照組相比增加明顯；（2）輻照后6h，JurkatT細(xì)胞表面CXCR4的表達(dá)量高于對照組；（3）JurkatT細(xì)胞PI3K、p-AKT、PAK1、Rac1表達(dá)水平

8、的變化與趨化能力的時間變化特征基本一致；（4）JurkatT細(xì)胞的IL-4的表達(dá)在照后3h、6h增高；IFN-γ在照后1h、3h、6h表達(dá)增加。
　　結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)條件下，電磁脈沖對雄性BALB/c小鼠胸腺的作用不敏感，但對脾臟作用顯著。脾臟的組織結(jié)構(gòu)遭到一定的破壞；脾臟重量增大，脾臟淋巴細(xì)胞數(shù)量增加，增加的主要是T淋巴細(xì)胞；但是淋巴細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞周期沒有顯著的改變；脾臟中的趨化因子表達(dá)增加，脾臟淋巴細(xì)胞的遷移能力增強(qiáng)。Jurk