芝麻素對肝癌防治作用的實驗研究.pdf

1、目的：肝細(xì)胞癌是人類發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一，在我國更是成為惡性腫瘤的第二位殺手。多年來從預(yù)防醫(yī)學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)的角度，對肝細(xì)胞癌的發(fā)病原因、病理機(jī)制、診斷治療等方面展開了多層次、多角度長期細(xì)致的研究，使人類對肝癌的診斷、治療水平均有了顯著提高。但現(xiàn)行治療方法是以手術(shù)為主的綜合治療，在目前西醫(yī)放化療可引起嚴(yán)重毒副作用的情況下，中醫(yī)藥治療原發(fā)性肝癌以其療效可靠、毒副反應(yīng)小而獨樹一幟，使中醫(yī)藥在原發(fā)性肝癌的防治領(lǐng)域中具有較大的優(yōu)勢，采

2、用中西醫(yī)結(jié)合綜合治療肝癌將成為一種必然的發(fā)展趨勢。芝麻作為天然植物在我國資源豐富，而且芝麻素的提取純度已高達(dá)99％，因此芝麻素有望成為防治原發(fā)性肝癌的一種新的藥物。
　　 方法：⑴實驗動物分組、給藥：將移植H22肝癌瘤株的昆明小鼠隨機(jī)分成：模型組、環(huán)磷酰胺組、芝麻素高濃度組、芝麻素低濃度組，每組16只，雌雄各半且分籠飼養(yǎng)，同時取正常的16只（雌雄各8只）小鼠作為正常組。其中正常組、模型組每天0.2 mL生理鹽水灌胃；環(huán)磷酰胺組每

3、日腹腔注射0.2g/L環(huán)磷酰胺生理鹽水溶液3 mL（30mg/Kg）；芝麻素高濃度組每日以15g/L芝麻素甲基纖維素懸濁液灌胃0.2 mL（150mg/Kg）；芝麻素低濃度組每日以1.5g/L芝麻素甲基纖維素懸濁液灌胃0.2 mL（15mg/Kg）。連續(xù)10 d。⑵檢測指標(biāo)：末次給藥24 h后，取小鼠尾血，計數(shù)白細(xì)胞。頸椎脫臼處死小鼠，取出小鼠的脾臟和胸腺，用濾紙吸干后稱重，計算胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)。剝離瘤塊稱重，計算腫瘤生長抑制率。將瘤

4、塊浸泡于4％多聚甲醛，常規(guī)石蠟包埋，切片后進(jìn)行HE0染色和PCNA的免疫組化染色，計算PCNA指數(shù)（PCNA LI）。⑶取對數(shù)生長期的H22細(xì)胞，將細(xì)胞濃度調(diào)整至5×104/ml。取200μl細(xì)胞懸液接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（每孔104個細(xì)胞），按實驗分組加入相應(yīng)的含不同濃度芝麻素RPMI1640培養(yǎng)液（8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml、128μg/ml），同時設(shè)空白對照組（不加芝麻素的培養(yǎng)基），每組設(shè)6個復(fù)孔

5、。采用MTT法在繼續(xù)培養(yǎng)后的24h、48h兩個時間點采用全自動酶標(biāo)儀測定各孔吸光值（OD），計算各組6個復(fù)孔的平均值。⑷肝癌病變模型的建立及給藥：大鼠適應(yīng)飼養(yǎng)3d后開始實驗，40只SD大鼠隨機(jī)分成正常組、模型組、芝麻素1組、芝麻素2組。正常組給予1.5ml的生理鹽水灌胃；模型組、芝麻素1組、芝麻素2組，均給予0.2％的DEN灌胃，按體質(zhì)量10mg/kg給藥，每只1.5ml/d，5次/周，連續(xù)14周；芝麻素1組、芝麻素2組同時分別給予1.

6、5ml的5.0mg/ml、1.0mg/ml芝麻素甲基纖維素懸濁液，5次/周，連續(xù)14周。⑸末次給藥后24h，將大鼠麻醉，稱體重；斷頭采血，分離血清，用生化自動分析儀檢測血清ALT、AST、ALP、GGT的含量；解剖腹腔，完整取出肝臟，稱肝重，計算肝指數(shù)，即肝重/體重（％）；記錄肝表面的結(jié)節(jié)數(shù)。
　　 結(jié)果：①芝麻素高濃度組瘤重與模型組比較無顯著差異（P>0.05）；芝麻素低濃度組較模型組、芝麻素高濃度組均低（P<0.05），但仍

7、比環(huán)磷酰胺組高（P<0.05）。②模型組白細(xì)胞較正常組高，環(huán)磷酰胺組較正常組低（P<0.05），芝麻素高濃度組和低濃度組均與正常組無差異（P>0.05）；對小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的影響：低濃度芝麻素組小鼠胸腺指數(shù)明顯高于模型組（P<0.05），和正常對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），脾臟指數(shù)與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），明顯高于正常對照組（P<0.05）；高濃度芝麻素組小鼠胸腺指數(shù)明顯低于正常對照組（P<0.05），脾

8、臟指數(shù)明顯高于正常對照組（P<0.05），其胸腺、脾臟指數(shù)與模型組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異（P均>0.05）。③腫瘤組織HE染色病理觀察：模型組腫瘤細(xì)胞排列緊密，核大深染，核分裂象多見。環(huán)磷酰胺組細(xì)胞排列稀疏，可見片狀壞死區(qū)，細(xì)胞結(jié)構(gòu)嚴(yán)重受損，核固縮、破碎、溶解、壞死較多見，胞質(zhì)內(nèi)可見空泡，胞質(zhì)邊界不明顯。芝麻素高濃度組和環(huán)磷酰胺組相比，表現(xiàn)為細(xì)胞排列較松散，但壞死細(xì)胞較少。芝麻素低濃度組細(xì)胞排列較稀疏，可見小片狀壞死區(qū)，有核固縮、溶解的現(xiàn)象

9、。④芝麻素對腫瘤組織PCNA表達(dá)的影響：芝麻素低濃度組和環(huán)磷酰胺組腫瘤細(xì)胞PCNA LI均明顯低于模型組（P<0.05）；但芝麻素低濃度組PCNA LI仍略高于環(huán)磷酰胺組，但無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；芝麻素高濃度組和模型組的PCNA LI比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。⑤芝麻素對小鼠肝癌H22細(xì)胞體外增殖的影響：8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml濃度的芝麻素組在作用24h后即表現(xiàn)出抑制H22細(xì)胞生長的作用，48h后抑制作

10、用最強(qiáng)，此三個劑量在兩個時間點對H22細(xì)胞的殺傷作用均無顯著差異。⑥芝麻素1、2組大鼠體重較正常組大鼠低（p<0.05），但較模型組高（p<0.05）；芝麻素1、2組大鼠肝重、肝指數(shù)均較正常組大鼠高（p<0.05），但較模型組低（p<0.05）；芝麻素1、2組大鼠肝表面癌結(jié)節(jié)數(shù)較模型組低（p<0.05）；芝麻素1、2組大鼠的體重、肝重、肝指數(shù)、肝表面癌結(jié)節(jié)數(shù)無顯著性差異（p>0.05）。⑦與正常組比較，芝麻素1、2組的血清ALP、GGT

11、。水平均明顯高于正常組（p<0.05），而ALT、AST水平均與正常組無顯著性差異（p>0.05）；與模型組比較，芝麻素1、2組的ALT、AST、ALP、 GGT水平均明顯低于模型組（p<0.05）；芝麻素1、2組的ALT、AST、ALP、 GGT水平無顯著性差異（p>0.05）。
　　 結(jié)論：⑴低濃度芝麻素對H22肝癌細(xì)胞荷瘤小鼠腫瘤生長有明顯的抑制作用。⑵芝麻素的抗腫瘤作用可能與促進(jìn)宿主免疫功能、抑制腫瘤細(xì)胞PCNA的表達(dá)有