急性壞死性胰腺炎中TLR4與NF-κB關系的實驗研究.pdf

1、研究背景：急性壞死性胰腺炎(Acute necrotizing pancreatitis，ANP)是一種常見的急重癥，發(fā)病率、死亡率高。經(jīng)研究證實多種細胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6 等活化與急性胰腺炎(Acute pancreatitis，AP)的發(fā)生進展關系密切。而Toll 樣受體4(Toll-like receptor 4，TLR4)、核因子-κB(Nuclear factor-kappaB，NF-κB)與這些細胞因子的

2、活化密切相關。它們在AP 發(fā)生發(fā)展中作為介導炎癥反應的樞紐起著重要作用。以往認為TLR4 與NF-κB 是上下游關系：即TLR4 觸發(fā)細胞內信號傳導通路，從而激活NF-κB，調控大量細胞因子釋放，介導炎性反應。目前認為能激活NF-κB 的除了TLR4 調控的細胞內信號通路外還有TNF-α、IL-1 調控的細胞內信號通路，且對TLR4/NF-κB 信號通路具體的傳導路徑又有了新的認識。因此有必要重新認識TLR4 與NF-κB 之間的關系。

3、 研究目的：觀察ANP 大鼠胰腺組織中TLR4 的表達情況；并且應用NF-κB 活化抑制劑四氫化吡咯二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)進行干預，觀察阻斷NF-κB 以后，TLR4 在ANP大鼠胰腺組織中表達的變化，探討ANP 中TLR4 與NF-κB 的關系及NF-κB 的活性對TLR4 表達的影響。 研究方法： 1）雄性SD 大鼠72 只，隨機分為假手術組(24

4、只)、ANP組（24 只）、PDTC 預處理組（24 只）三組。胰管內注入5％牛磺膽酸鈉建立大鼠ANP 模型；PDTC 預處理組在建立ANP 模型前1h，100mg/kg腹腔注射PDTC。H&E 染色及透射電鏡觀察胰腺組織病理學改變；酶動力化學法檢測血清淀粉酶（AMS）和乳酸脫氫酶（LDH）；ELISA 法檢測血清TNF-α、IL-1β、IL-6；RT-PCR 法檢測胰腺組織TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA 表達；免疫組化及W

5、estern blot 法檢測胰腺組織TLR4 和NF-κB 蛋白表達。 研究結果： 1）同假手術組相比，ANP 組大鼠胰腺組織光鏡下有明顯出血、腺泡壞死和炎癥浸潤；電鏡下大鼠腺泡細胞粗面內質網(wǎng)明顯擴張、酶原顆粒明顯減少、線粒體明顯腫脹；血清AMS 和LDH 含量增加（P<0.05）；血清TNF-α、IL-1β、IL-6 含量增加（P<0.05）；胰腺組織TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA 表達增加（P<0.05

6、）；胰腺組織TLR4 和NF-κB表達增加（P<0.05）。 2）同ANP 組大鼠相比，PDTC 預處理組大鼠胰腺組織出血、腺泡壞死和炎癥浸潤程度明顯減輕；電鏡下胰腺組織病理學改變明顯減輕；血清AMS 和LDH 含量，TNF-α、IL-1β、IL-6 含量明顯減少（P<0.05）；胰腺組織TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA 表達，TLR4和NF-κB 表達明顯減少（P<0.05）。 主要結論及意義： 1）T

7、LR4 和NF-κB 在ANP 大鼠胰腺組織中的表達水平明顯增高，提示TLR4 和NF-κB在ANP 的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。 2）PDTC 抑制ANP 大鼠胰腺組織中NF-κB 表達的同時，下調TLR4 蛋白水平表達和細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6 表達，提示PDTC 對ANP有治療作用；PDTC 能顯著降低ANP 嚴重程度的機制可能不僅是抑制了NF-κB，還可能是由于存在其它調節(jié)機制。 3）在ANP 發(fā)生發(fā)