二氫嘧啶脫氫酶基因多態(tài)性與滋養(yǎng)細胞腫瘤化療的個體化.pdf

1、大劑量、恒速靜脈輸注5-FU或FUDR治療妊娠滋養(yǎng)細胞腫瘤的療效顯著，但治療中不可避免地會引發(fā)不良反應(yīng)。臨床中使用FUDR或5-FU的劑量一般是根據(jù)患者的體重或體表面積計算的。相同劑量下，患者的個體差異很大，少數(shù)患者可能出現(xiàn)骨髓抑制、偽膜性腸炎和心肌損害等，嚴重時甚至危及生命。 氟化嘧啶類藥物在體內(nèi)多轉(zhuǎn)化為5-FU而發(fā)揮作用，二氫嘧啶脫氫酶(DPD)是5-FU分解代謝的限速酶，其活性的高低將影響到5-FU代謝的快慢，進而影響5-

2、FU和其他氟化嘧啶類藥物的毒性。DPD由二氫嘧啶脫氫酶基因(DPYD)編碼產(chǎn)生，DPYD序列上堿基的突變可能導(dǎo)致DPD活性缺乏。體內(nèi)DPD活性可以通過血漿中內(nèi)源性尿嘧啶(U)及其代謝產(chǎn)物二氫尿嘧啶(UH2)的比值間接反映。隨著對DPD與DPYD分子基礎(chǔ)的闡明和相關(guān)檢測技術(shù)的發(fā)展，檢測DPD活性和DPYD基因多態(tài)性可能有利于預(yù)測氟化嘧啶類藥物毒性和療效，將可能成為減少或避免患者發(fā)生嚴重毒性反應(yīng)的一種手段，但國內(nèi)外這方面的相關(guān)研究并不深入。

3、 為此，本研究試圖通過篩查妊娠滋養(yǎng)細胞腫瘤患者的DPYD基因型、測定DPD活性和血藥濃度并結(jié)合患者的療效和安全性，探索DPYD多態(tài)性、DPD活性與氟化嘧啶類藥物治療妊娠滋養(yǎng)細胞腫瘤療效和安全性間的關(guān)系，為氟化嘧啶類藥物的個體化治療提供依據(jù)。 首先，本研究建立了人血漿中DPD活性的間接測定方法-U和UH2的HPLC測定方法，通過測定UH2/U比值間接表示體內(nèi)DPD活性，為本研究提供方法學(xué)基礎(chǔ)。其次，在本實驗室原有的測定人血

4、清中FUDR的HPLC方法基礎(chǔ)上，進行適當(dāng)調(diào)整，使檢測限提高到2.5μg·L-1，滿足了研究需要。為篩查患者是否存在A74G、T85C(DPYD*9)、IVS14+1G→A(DPYD*2)、C2303A和A2846T等5個DPYD突變，研究中建立了檢測各個位點的多聚酶鏈反應(yīng)(PCR)-直接測序方法。 在此基礎(chǔ)上，本研究在2007年2月～2008年1月，選擇經(jīng)臨床確診為妊娠滋養(yǎng)細胞腫瘤、使用含5-FU或FUDR的常規(guī)方案治療并簽署

5、知情同意書的患者，采集血標(biāo)本，測定其DPD活性、DPYD基因型及輸注2h和停藥30min的血藥濃度，記錄患者的療效和安全性等指標(biāo)。同時，對2000年和2005年兩個年度使用氟化嘧啶類藥物治療妊娠滋養(yǎng)細胞疾病患者的234份病歷進行回顧性分析，篩選出發(fā)生過嚴重不良反應(yīng)或因不良反應(yīng)而停藥者，發(fā)出隨診函95份；對25名自愿回訪的患者采集血標(biāo)本，測定其DPD活性和DPYD基因型。應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)方法，分析DPYD多態(tài)性和DPD活性在中國人群中的分布狀況

6、，考察DPD活性、DPYD基因型、血藥濃度、療效和不良反應(yīng)之間的關(guān)系。 通過對2000年和2005年使用氟化嘧啶類藥物的妊娠滋養(yǎng)細胞疾病患者的病歷回顧分析發(fā)現(xiàn)，二聯(lián)療法時，初治患者組和外院轉(zhuǎn)入治療患者組之間，使用含F(xiàn)UDR和含5-FU化療方案的Ⅲ/Ⅳ度腹瀉、白細胞減少、中性粒細胞減少和血小板減少癥發(fā)生率均無統(tǒng)計學(xué)差異，但初治患者中使用含F(xiàn)UDR化療方案的Ⅲ/Ⅳ度惡心、嘔吐發(fā)生率顯著高于含5-FU的化療方案。三聯(lián)療法時，初治患者組

7、和外院轉(zhuǎn)入治療患者組相比，含F(xiàn)UDR方案的Ⅲ/Ⅳ度惡心、嘔吐反應(yīng)均顯著高于含5-FU方案，而Ⅲ/Ⅳ度腹瀉發(fā)生率沒有顯著差異；含F(xiàn)UDR方案的。Ⅲ/Ⅳ度骨髓抑制發(fā)生率高于含5-FU方案，其中初治患者組Ⅲ/Ⅳ度中性粒細胞減少和外院轉(zhuǎn)入治療組Ⅲ/Ⅳ度白細胞減少、中性粒細胞減少和血小板減少癥發(fā)生率均有顯著差異。 本研究首次在中國人群中發(fā)現(xiàn)一例C2303A雜合體變異患者，并發(fā)現(xiàn)DPYD﹡2、DPYD*9雜合體變異者。DPYD﹡9等位基因發(fā)

8、生頻率在化療組和回訪組中分別為6.93％和6.25％，呈多態(tài)性分布；DPYD*2等位基因發(fā)生頻率在化療組和回訪組中分別為0.00％和2.00％；C2303A等位基因發(fā)生頻率在化療組和回訪組中分別為0.49％和0.00％；研究中未發(fā)現(xiàn)A74G和A2846T變異。 化療組和回訪組患者的UH2/U比值分別為7.91±3.27和7.46±2.00，均呈正態(tài)分布，但個體間變異程度大?？疾霼H2/U比值(反映DPD活性)與不良反應(yīng)的關(guān)系發(fā)現(xiàn)

9、，患者UH2/U比值與最低白細胞計數(shù)、粒細胞計數(shù)以及血小板計數(shù)均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.424、0.425和0.281?？梢?，患者的UH2/U比值越低，出現(xiàn)白細胞減少和中性粒細胞減少癥的嚴重程度越高。DPYD*2雜合體變異或C2303A雜合體變異患者的UH2/U比值低于DPD活性均值的70％，且化療反應(yīng)相對嚴重。DPYD﹡9雜合體變異與DPD活性降低和引起嚴重粒細胞減少癥之間未見明顯相關(guān)關(guān)系。通過相對工作特征曲線評價，將DPD活性為

10、7.21作為預(yù)測可能發(fā)生嚴重中性粒細胞減少癥的臨界值。 UH2/U比值與全部患者的腫瘤細胞殺滅率間無明顯相關(guān)關(guān)系；但腫瘤細胞殺滅率＜1的患者，UH2/U比值與滋養(yǎng)細胞殺滅率明顯負相關(guān)(r=-0.540，P=0.002)。全部患者的UH2/U比值與FUDR穩(wěn)態(tài)血藥濃度和停藥后30min血藥濃度之間未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性；以化療劑量分組，1125mg組和1500mg劑量組患者的UH2/U比值與FUDR穩(wěn)態(tài)血藥濃度的相關(guān)系數(shù)分別為-0.385和

11、-0.552，但無統(tǒng)計學(xué)差異；使用FUDR劑量為1250mg的患者，UH2/U比值與FUDR穩(wěn)態(tài)血藥濃度負相關(guān)(r=-0.430，P=0.032)，提示UH2/U比值與FUDR穩(wěn)態(tài)血藥濃度可能存在負相關(guān)關(guān)系，即DPD活性越低，F(xiàn)UDR穩(wěn)態(tài)濃度越高。 本課題的初步結(jié)論是：1)氟化嘧啶類藥物治療妊娠滋養(yǎng)細胞疾病中，含F(xiàn)UDR的三聯(lián)療法方案引發(fā)嚴重惡心、嘔吐和血液不良反應(yīng)的發(fā)生率高于含5-FU的化療方案。2)中國滋養(yǎng)細胞腫瘤患者中存在