腫瘤患者二氫嘧啶脫氫酶基因單核苷酸多態(tài)性分析.pdf

1、藥物療效和毒性存在個體差異是臨床常見的現(xiàn)象，癌癥患者接受化療時更為明顯，一直受到臨床醫(yī)生關注。不少臨床因素影響人體對藥物的反應，但是隨著分子生物學、分子遺傳學與分子藥理學，特別是基因組學的發(fā)展，人們逐漸認識到不同個體對同一藥物的不同反應大多源于基因的多態(tài)性。 5-氟尿嘧啶(5-FU)自問世以來，一直廣泛應用于腫瘤臨床，是胃腸道腫瘤和頭頸部腫瘤的主要抗癌藥物之一。二氫嘧啶脫氫酶(dihydropyrimidinedehydroge

2、nase，DPD)是5-FU以及口服嘧啶類化療藥物代謝過程中的關鍵酶，其活性在一般人群存在個體差異。臨床上可以見到DPD酶活性部分或完全缺乏的患者接受5-FU化療后療效明顯，但是出現(xiàn)嚴重毒副作用。研究表明DPD酶活性受DPD酶基因(dihydropyrimidinedehydrogenasegene，DPYD)多態(tài)性的影響，而基因多態(tài)性最常見的表現(xiàn)形式為單核苷酸多態(tài)性(SingleNucleotidePolymorphisms，SNP)

3、。為提高5-FU及嘧啶類藥物的療效及預防和減少其毒副反應，更好地實現(xiàn)個體化治療，檢測DPD活性及DPYD的SNP具有重要的意義。 現(xiàn)已經(jīng)明確30多種不同DPYD的SNP，其中大部分SNP是在DPD酶活性缺乏情況下出現(xiàn)嚴重臨床癥狀的腫瘤患者中測得，但關于DPYD基因型與表型之間的關系目前不甚明了。VanKuilenburg報道GIVS14+1ASNP幾乎完全局限于DPD活性低的患者，DPD活性低的患者SNP檢出率達44％，而DPD

4、活性正常的患者為4％，故推薦西歐癌癥患者接受5-FU化療前篩選有無GIVS14+1ASNP的存在。Hui-HuaHsiao等采用限制性酶切法檢測300例中國臺灣健康人群DPYD的基因多態(tài)性，此研究涉及亞洲人群中11種已明確的DPYD基因多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)4種SNP即A74G、T85C、A1627G、G2194A，它們分別位于Exon2，Exon13和Exon18，推測這3個Exon可能是中國人群SNP發(fā)生的熱點位置。基因多態(tài)性具有顯著的種族和

5、地域性差異，關于中國大陸人群DPYD基因多態(tài)性的相關報道目前少見。 目的:分析中國大陸癌癥患者DPYD基因Exon2，Exon13，Exon14和Exon18的單核苷酸多態(tài)性(SNP)類型及其發(fā)生頻率，觀察此SNP是否存在種族差異和探討此SNP與DPD酶活性之間的相關性。 方法:所有血標本來源于中山大學腫瘤防治中心收治的初治鼻咽癌和結直腸癌患者，其中2004年10月到2005年4月隨機收集患者血標本，2005年5月到20

6、05年8月收集DPD酶活性低(＜2.00)以及DPD活性高(＞2.5倍正常值下限5.0)的患者血標本。共收集142例血標本，其中男性100例，女性42例；鼻咽癌患者60例，結直腸癌患者82例。 DPD酶活性測定采用反相HPLC法，通過檢測血漿中H2U/U的比值間接反映DPD的活性。采用PCR技術擴增DPYD基因的Exon2，Exon13，Exon14和Exon18外顯子，從正反兩個方向?qū)U增片斷進行DNA測序和分析。 采

7、用SPSS12.0軟件包。非參數(shù)單樣本Kolmogorov-Smirnovtest檢驗DPD活性是否符合正態(tài)分布；x2檢驗用于DPYDSNP發(fā)生頻率與臨床資料間相關性的分析；2個獨立樣本Mann-Whitneytest和k個獨立樣本Kruskal-WallisHtest分別應用于2組和3組DPD活性間的比較。P值＜0.05認為具有統(tǒng)計學意義。 結果:1.DPD活性存在個體差異，其分布不遵循正態(tài)分布。DPD活性差異與性別有關，與年

8、齡及腫瘤類型無關。 2.在DPYD基因Exon2，Exon13，Exon14，Exon18中發(fā)現(xiàn)4種SNP即T85C、A1627G、T1896C和G2194A。C61T、G62A、A74G、G1601A、T1679G、C1714G和GIVS14+1ASNP在本研究未發(fā)現(xiàn)。 3.將T85C、A1627G和T1896C三種SNP與DPD酶活性進行統(tǒng)計學分析，未發(fā)現(xiàn)此SNP與DPD活性之間的相關性。 4.將T85C，A

9、1627G，T1896C三種SNP發(fā)生頻率與臨床資料進行統(tǒng)計學分析，發(fā)現(xiàn)T1896CSNP在男性患者中的發(fā)生率比女性高。 結論:1.DPD活性存在個體差異，活性差異與性別有關； 2.GIVS14+1ASNP存在種族差異； 3.中國癌癥患者中位于DPYD2，13，14和18號外顯子的SNP與DPD活性之間無明顯的相關性，提示DPYD基因型與表型之間可能不存在相關性； 4.T1896CSNP在男性患者中的發(fā)生