XIOsPR10基因轉(zhuǎn)化水稻研究及其功能初探.pdf

1、PR10蛋白的表達(dá)與植物系統(tǒng)獲得性抗性反應(yīng)(SAR)有著緊密的聯(lián)系，在很多植物對(duì)病原菌的防御反應(yīng)中PR1O類(lèi)蛋白都具有轉(zhuǎn)錄表達(dá)活性。許多研究表明PR10類(lèi)蛋白在植物防御反應(yīng)中具有重要的作用。為了更好地研究水稻XIOsPR10基因的功能，及其在水稻抗病反應(yīng)中的的作用，我們構(gòu)建了相應(yīng)的植物過(guò)量表達(dá)載體以及RNAi表達(dá)載體，并通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將這兩個(gè)載體分別轉(zhuǎn)入水稻中，希望通過(guò)對(duì)比能夠更好地了解XIOsPR10基因的功能；同時(shí)通過(guò)原核表達(dá)

2、得到了融合了His標(biāo)簽的目的蛋白，希望以此研究其活性，也為進(jìn)一步研究水稻XIOsPR10基因功能奠定了基礎(chǔ)。 首先，我們根據(jù)得到的XIOsPR10基因cDNA序列構(gòu)建了植物過(guò)量表達(dá)載體p1301-35S-XIOsPR10-Tnos以及RNA干擾表達(dá)載體pDS1301-XIOsPR10，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法分別將這兩個(gè)載體轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中。對(duì)得到的再生水稻通過(guò)組織化學(xué)染色、PCR檢測(cè)以及斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證后確認(rèn)，重組質(zhì)粒已經(jīng)成功轉(zhuǎn)入水稻植

3、株中。進(jìn)一步通過(guò)半定量RT-PCR對(duì)轉(zhuǎn)基因株系RNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)過(guò)量表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植株中XIOsPR10基因轉(zhuǎn)錄水平明顯高于野生型的對(duì)照，這說(shuō)明在過(guò)量表達(dá)植株中XIOsPR10基因能夠穩(wěn)定表達(dá)并達(dá)到較高的水平。而在機(jī)械損傷誘導(dǎo)的條件下，有的RaNAi轉(zhuǎn)基因植株并不表達(dá)XIOsPR10基因，這說(shuō)明在這些RNAi植株中XIOsPR10基因成功地被敲除，但我們也發(fā)現(xiàn)并不是所有的RNAi植株都達(dá)到100％的干擾效率，有的RNAi轉(zhuǎn)化植株的