加減烏梅丸對激素干預后哮喘大鼠氣道炎癥和HPA軸影響的實驗研究.pdf

1、糖皮質激素吸入劑已成為支氣管哮喘抗炎治療的基礎藥物，療效確切，副作用小，但臨床上仍有一部分病人需長期口服較大劑量激素控制病情，停藥或減量均會導致哮喘加重，此類哮喘被稱為激素依賴型哮喘(SDA)，SDA屬于難治性哮喘范疇。 SDA在撤藥期間表現為氣道炎癥持續(xù)存在和HPA軸的嚴重受損，炎癥的存在主要由于T淋巴細胞亞群Th1/Th2比例失衡，即Th1型細胞功能被抑制，Th2型細胞處于激活狀態(tài)，后者通過分泌白介素4(IL-4)、白介素5

2、(IL-5)等細胞因子促使嗜酸性粒細胞(EOS)、肥大細胞等炎癥細胞不斷分化、聚集和激活以及IgE的合成，從而使氣道反應性持續(xù)增高，同時大量外源性激素反向調節(jié)GCRmRNA的轉錄水平，使其數量減少或活性降低，導致患者對激素的依賴。激素一旦減量或停用即可引起哮喘復發(fā)，嚴重甚至導致死亡。因此對激素依賴型哮喘治療是當今研究的熱點，問題的關鍵是尋求既能恢復因激素大量長期應用而被抑制的HPA軸功能，又能夠調節(jié)Th1/Th2比值，從而降低氣道高反應

3、性，減少激素治療用量，減輕全身性不良反應的有效方案，以實現對患者生活質量的全面提高。 導師武維屏教授多年臨床探索和實驗研究認為：陰陽兩虛，虛風內動，痰瘀互阻，寒熱錯雜是激素依賴型哮喘的基本病機特點。烏梅丸為《傷寒論》厥陰證主方，該方寒熱并用，氣血雙調，標本兼顧，與SDA病機特點相吻合，故能使機體神經-內分泌-免疫網絡系統(tǒng)重獲穩(wěn)態(tài)，從而使激素得以撤除，哮喘得以控制。 1.目的本實驗即以上述理論為基礎，通過對哮喘模型腹腔注射

4、地塞米松，制備經過激素干預后的哮喘大鼠模型，通過研究激素干預后哮喘模型大鼠在撤藥過程中及應用中西藥治療后氣道炎癥和HPA軸相應指標的變化情況，揭示激素依賴型哮喘撤減激素過程中的病機演變規(guī)律及其內在物質基礎，探討加減烏梅丸治療SDA的療效機制及作用環(huán)節(jié)。 2.方法2.1測定肺功能：用小型動物肺功能儀測定。 2.2ELISA法測定血漿IFN-γ和IL-4，下丘腦CRH，血漿ACTH及CORT含量。 2.3原位雜交方法

5、測定肺組織IFN-γ、IL-4、IL-5mRNA表達。 2.4RT-PCR方法半定量分析肺組織內GCRmRNA的表達。 2.5統(tǒng)計方法：所有數據以x±s表示，組間差異利用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包進行ANOVA檢驗，以P＜0.05差異有顯著性。 3.內容3.1加減烏梅丸對激素干預后哮喘模型大鼠肺功能和肺組織形態(tài)學的影響研究3.2加減烏梅丸對激素干預后哮喘模型大鼠IFN-γ和IL-4含量及其mRNA表達的影響研究3

6、.3加減烏梅丸對激素干預后哮喘模型大鼠IL-5mRNA表達的影響研究3.4加減烏梅丸對激素干預后哮喘模型大鼠HPA軸功能及GCRmRNA的影響研究4.結果與結論4.1一般生活狀態(tài)變化：與激素干預組比較，在撤前，加減烏梅丸組的呼吸急促，節(jié)律不齊和幅度不規(guī)整等癥狀明顯減輕，類似于普米克組；在撤中和撤后，加減烏梅丸組呼吸道癥狀基本控制，而普米克組呼吸道癥狀雖被控制，卻有不同程度的四肢發(fā)涼，口鼻、眼眶、尾尖紫紺明顯，毛發(fā)粗糙少澤，喜群臥不喜動等

7、癥，此類癥狀在加減烏梅丸組明顯改善。 4.2肺功能和病理學改變：與激素干預組比較，加減烏梅丸組第2周時哮喘癥狀和肺通氣功能明顯改善(P＜0.05)；撤中和撤后肺功能顯著改善(P＜0.01)，支氣管粘膜上皮排列基本整齊，管腔內炎性滲出物很少，管壁附近及肺泡間隔未見明顯炎性細胞浸潤，偶見嗜酸性粒細胞。 4.3大鼠血清IL-4、IFN-γ含量及其在肺組織中mRNA的表達：與激素干預組比較，加減烏梅丸組在撤前炎癥明顯減輕，但效果

8、略次于普米克組(P＞0.05)；在撤中和撤后兩組均能顯著下調IL-4含量及mRNA的陽性表達(P＜0.01)，并能升高IFN-γ含量及mRNA的陽性表達(P＜0.05)，與正常組相比無顯著性差異(P＞0.05)。說明加減烏梅丸通過整體調節(jié)機體陰陽，能明顯良性調節(jié)IL-4/IFN-γ比例，其抗炎作用在撤前與普米克相似，在撤中和撤后能穩(wěn)定病情，使炎癥病情逐步趨于好轉，其療效近似于普米克組(P＞0.05)。 4.4大鼠肺組織中IL-5

9、mRNA的表達：與激素干預組比較，加減烏梅丸在撤前能明顯降低大鼠肺組織中IL-5mRNA的陽性表達，在撤中和撤后仍顯著降低大鼠肺組織中IL-5mRNA的陽性表達，與普米克組、正常組相比無顯著性差異(P＞0.05)。從另一側面說明加減烏梅丸具有明顯的抗炎作用。 4.5大鼠下丘腦CRH、血清ACTH、CORT含量及肺組織GCRmRNA表達：與激素干預組比較，加減烏梅丸在撤前、撤中、撤后有逐步升高CRH、ACTH、CORT含量和GCR