暢肺防哮方對哮喘大鼠氣道重構(gòu)和炎癥介質(zhì)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：暢肺防哮方是多年來治療哮喘的經(jīng)驗(yàn)方，應(yīng)用于臨床，療效顯著，其免疫作用已有初步探索。本課題通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，研究該方對哮喘大鼠支氣管、肺組織形態(tài)學(xué)的影響，其血液、肺泡灌洗液中嗜酸粒細(xì)胞(EOS)、IgE及嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白(Eotaxin)、粘附分子(ICAM-1)表達(dá)水平的變化。進(jìn)一步從細(xì)胞和分子水平探討暢肺防哮方治療哮喘的作用機(jī)理，為開發(fā)臨床防治哮喘的有效中藥復(fù)方制劑奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.中藥制備

2、>　　 將方中麻黃、萊菔子、枳殼提取揮發(fā)油，藥渣與處方余藥同水煎煮三次，過濾濃縮后制成浸膏，按比例加入一定量的揮發(fā)油，混均，供實(shí)驗(yàn)動物灌胃用。
　　 2.分組與造模
　　 6周齡清潔級SD雄性大鼠60只，體重150±20 g，隨機(jī)分為6組，每組10只。A組：空白對照組，B、C、D組分別為暢肺防哮方大、中、小劑量組。E組：西藥(地塞米松)組。F組：病理模型組。
　　 除A組外，各組大鼠皮下注射1 ml含1 mg卵

3、蛋白和200 mg氫氧化鋁的生理鹽水，同時(shí)腹腔注射百日咳桿菌疫苗6×109個(gè)作免疫增強(qiáng)劑。A組僅腹腔注射1 ml生理鹽水。第15天霧化吸入2％的卵蛋白激發(fā)，每日1次，每次30min，連續(xù)7天。A組霧化吸入生理鹽水。
　　 3.給藥
　　 各組于第8天開始灌胃給藥。B、C、D組分別給予暢肺防哮方大劑量33.84 g生藥/kg/d、中劑量16.92 g生藥/kg/d、小劑量8.46 g生藥/kg/d，E組給予西藥地塞米松0.

4、75 mg/kg/d，A、F組給予等量生理鹽水。給藥容積均為20 ml/kg，連續(xù)13天。
　　 4.取材
　　 末次引喘24小時(shí)后，大鼠麻醉，頸動脈采血3 ml，結(jié)扎左肺，支氣管插管，右肺進(jìn)行支氣管肺泡灌洗(2 ml，3次)，收集灌洗液(BALF)。生理鹽水沖洗血管后，多聚甲醛灌注固定。取右中肺，石蠟包埋，切片。
　　 5.檢測
　　 ①取支氣管肺泡灌洗液(BALF)0.1 ml，細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，其余B

5、ALF1200 r/min，10min離心，沉淀物涂片，分類計(jì)數(shù)。上清液-20℃貯存，ELISA法測Eotaxin和ICAM-1含量。
　　 ②取1滴血涂片，血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。放免法測血中IgE水平。
　　 ③支氣管肺組織切片，常規(guī)HE染色，光鏡觀察，圖像分析軟件分析其氣道重構(gòu)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.氣道局部炎癥和肺泡灌洗液、血液中細(xì)胞學(xué)的變化
　　 1.1肺組織病理切片HE染色顯示，暢肺防

6、哮方各劑量組及地塞米松組較病理模型組，肺組織嗜酸性粒細(xì)胞和炎癥細(xì)胞浸潤明顯增少，氣道重構(gòu)的程度明顯減輕。
　　 1.2肺泡灌洗液中細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示，暢肺防哮方各劑量組及地塞米松組可使嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及百分率明顯降低，與病理模型組相比較有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.001)。
　　 1.3血液細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示，暢肺防哮方各劑量組及地塞米松組可使嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及百分率明顯降低，與病理模型組相比較有顯著性差異(P＜0.01、P

7、＜0.001)。
　　 2.肺泡灌洗液中嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白(Eotaxin)、細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)和外周血中IgE的變化
　　 2.1暢肺防哮方各劑量組及地塞米松組可使Eotaxin的含量明顯降低，與病理模型組相比較有顯著性差異(P＜0.01、P＜0.001)。
　　 2.2暢肺防哮方各劑量組及地塞米松組可使ICAM-1的含量明顯降低，與病理模型組相比較有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.001)。