IL-2增強Herceptin介導(dǎo)的腫瘤殺傷作用.pdf

1、背景：
　　 HER2基因的過度表達(dá)與乳腺癌的關(guān)系極為密切，它增加腫瘤細(xì)胞的侵襲力，破壞機體組織抗侵襲屏障，通過增加血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤新生血管形成，促進(jìn)癌細(xì)胞的擴散和轉(zhuǎn)移，參與化療耐藥的機制，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活。這些特殊的分子生物功能奠定了HER2能作為乳腺癌生物治療靶點的理論基礎(chǔ)。Herceptin是一種人鼠嵌合型單克隆抗體，可選擇性地與HER2受體的胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合。Herceptin可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞表

2、面HER2受體內(nèi)化，呈劑量依賴關(guān)系。抑制HER2與該家族的其它成員形成二聚體，阻礙酪氨酸激酶介導(dǎo)的細(xì)胞增殖信號傳入，下調(diào)cyclinD1表達(dá)水平，上調(diào)P27表達(dá)水平。經(jīng)Herceptin處理后的腫瘤細(xì)胞，多數(shù)停留在G1期，S期數(shù)目減少，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖活性。腫瘤細(xì)胞分泌VEGF(血管內(nèi)皮生長因子)促進(jìn)腫瘤組織內(nèi)血管生成，獲得營養(yǎng)供應(yīng)。Herceptin可以減少VEGF的產(chǎn)生，抑制腫瘤細(xì)胞生長。目前研究表明Herceptin通過介導(dǎo)AD

3、CC作用殺傷HER2受體陽性腫瘤細(xì)胞的效應(yīng)是確定的，且殺傷作用與腫瘤細(xì)胞HER2受體的表達(dá)水平呈正比。在應(yīng)用人源化單克隆抗體Herceptin進(jìn)行抗腫瘤治療時，往往忽視了乳腺癌患者體內(nèi)免疫效應(yīng)細(xì)胞的質(zhì)量和數(shù)量，以至于影響抗腫瘤治療的效果。有文獻(xiàn)報道晚期腫瘤患者外周CTL細(xì)胞和NK細(xì)胞數(shù)量減少，CD16表達(dá)水平低下，可能導(dǎo)致應(yīng)用Herceptin進(jìn)行抗腫瘤治療時效果不佳，此現(xiàn)象應(yīng)該引起臨床醫(yī)務(wù)工作者的足夠重視，在應(yīng)用單克隆抗體Hercep

4、tin進(jìn)行抗腫瘤治療時輔以活化免疫效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞因子，可能提高抗腫瘤效果。
　　 目的：
　　 HER2屬酪氨酸激酶受體家族成員之一，在乳腺癌、卵巢癌、胃癌等多種惡性腫瘤中，有HER2基因過表達(dá)的現(xiàn)象，表現(xiàn)為腫瘤侵襲性增強、患者預(yù)后差。HER2是腫瘤生物治療的靶點，針對HER2胞外區(qū)的人源化單克隆抗體Herceptin主要通過介導(dǎo)ADCC作用有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，并已廣泛應(yīng)用于乳腺腫瘤治療。在應(yīng)用
　　 Her

5、ceptin進(jìn)行抗腫瘤治療時，乳腺癌患者免疫效應(yīng)細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量將直接影響抗腫瘤治療的效果。本研究將探討乳腺癌患者外周血單個核細(xì)胞(PBMC)介導(dǎo)LAK樣殺傷作用和ADCC作用下降的機制，觀察IL-2增強乳腺癌患者PBMC介導(dǎo)殺傷作用的效果，為輔以細(xì)胞因子的靶向抗腫瘤治療新策略提供理論依據(jù)和實驗數(shù)據(jù)。
　　 方法：
　　 應(yīng)用MTT法檢測健康對照組、早期乳腺癌患者、進(jìn)展期乳腺癌患者、IL-2(1000U/ml，5d)處理

6、后進(jìn)展期乳腺癌患者外周PBMC對SKBR3細(xì)胞的LAK樣殺傷作用；應(yīng)用非核素細(xì)胞毒試劑盒(LDH釋放法)檢測由Herceptin介導(dǎo)的，健康對照組、早期乳腺癌患者、進(jìn)展期乳腺癌患者、IL-2(1000U/ml，5d)處理后進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3細(xì)胞的ADCC殺傷作用；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測健康對照組、早期乳腺癌患者、進(jìn)展期乳腺癌患者、IL-2(1000U/ml，5d)處理后進(jìn)展期乳腺癌患者外周血CD3+CD8+T細(xì)胞、C

7、D3-CD56+NK細(xì)胞水平和CD16ζ的表達(dá)．
　　 結(jié)果：
　　 1．健康對照組、早期乳腺癌患者、進(jìn)展期乳腺癌患者、IL-2(1000 U/ml，5d)處理后進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC中CD3+CD8+T細(xì)胞所占比例分別是(24．5±4．2)％、(22．1±5．6)％、(17．7±5．1)％，(38．3±6．7)％。進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC中CD3+CD8+T細(xì)胞水平較健康對照組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(

8、P<0．05)。IL-2(1000 U/ml，5d)處理后進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC中CD3+CD8+T細(xì)胞較處理前明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．01=。
　　 2．在效靶比分別為5:1、10:1、20:1、40:1時，健康對照組外周血PBMC對SKBR3的LAK樣殺傷作用分別是(8．91±3．25)％、(14．77±3．07)％、(17．83±4．87)％、(25．29±2．31)％；早期乳腺癌患者外周血 PBMC對

9、SKBR3的LAK樣殺傷作用分別是(8．45±3．89)％(14．11±4．2)％(18．45±5．01)％(23．07±3．45)％；進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的LAK樣殺傷作用分別是(6．95±5．44)％、(11．56±7．25)％、(15．41±7．35)％、(20．11±5．21)％；IL-2(1000U/ml，5d)處理后進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的LAK樣殺傷作用分別是(14．79±5．19

10、)％、(20．14±7．7)％、(42．21±8．97)％、(51．07±7．36)％。進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的LAK樣殺傷作用較健康對照組降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。IL-2(1000 U/ml，5d)處理后進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的LAK樣殺傷作用較處理前明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。
　　 3．健康對照組、早期乳腺癌患者、進(jìn)展期乳腺癌患者、IL-2(1000

11、U/ml，5d)處理后進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC中CD3-CD56+NK細(xì)胞所占比例分別是(12．1±5．1)％、(11．8±6．3)％、(8．4±4．7)％、(14．1±3．2)％；CD16ζ的表達(dá)水平分別是(95．4±2．5)％、(92．1±3．9)％、(65．6±14．5)％、(90．4±5．7)％。進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC中CD3-CD56+NK細(xì)胞所占比例和CD16ζ的表達(dá)水平較健康對照組、早期乳腺癌患者明顯降低，差

12、異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。IL-2(1000 U/ml，5d)處理后進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC中CD3-CD56+NK細(xì)胞所占比例和CD16ζ的表達(dá)水平較處理前明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。
　　 4．在效靶比分別為5:1、10:1、20:1、40:1時，Herceptin介導(dǎo)的健康對照組外周血PBMC對SKBR3的ADCC殺傷作用分別是(36．5±8．7)％、(44．4±5．1)％、(53．7±7．9)

13、％、(63．1±10．1)％：Herceptin介導(dǎo)的早期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的ADCC殺傷作用分別是(32．7±10．3)％、(40．5±10)％、(54．1±9．9)％、(59．6±11．3)％；Herceptin介導(dǎo)的進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的ADCC殺傷作用分別是(20．0±5．1)％、(28．8±8．7)％、(35．2±7．8)％、(42．1±6．9)％；Herceptin介導(dǎo)的，IL-2(1

14、000 U/ml，5d)處理后進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的ADCC殺傷作用分別是(35．1±7．8)％、(47．7±9．2)％、(50．9±6．7)％、(66．9±7．8)％。各效靶比時，進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的ADCC殺傷作用較健康對照組均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。IL-2(1000U/ml，5d)處理后進(jìn)展期乳腺癌患者外周血PBMC對SKBR3的ADCC殺傷作用較處理前明顯增高，差異