刺參高溫脅迫相關(guān)蛋白的識(shí)別與鑒定研究.pdf

1、刺參(Apostichopus japonicus)又稱仿刺參，屬于棘皮動(dòng)物門、海參綱，是一種高蛋白、低糖、低脂肪、無(wú)膽固醇的重要的養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)水產(chǎn)動(dòng)物，具有巨大的經(jīng)濟(jì)和藥用價(jià)值。溫度是影響刺參生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖的最主要環(huán)境因子之一，當(dāng)海水溫度升高到一定范圍（20-25℃）后，成體刺參攝食停止、活動(dòng)降低、消化道退化、體質(zhì)量減輕、代謝降低、能量利用對(duì)策改變，進(jìn)入夏眠。因此，開展高溫脅迫條件下刺參差異表達(dá)蛋白的的研究對(duì)刺參養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展具有重要

2、的實(shí)踐意義。
　　本研究采用比較蛋白質(zhì)組學(xué)方法，對(duì)適宜生長(zhǎng)條件（16℃）和高溫脅迫下（25℃）刺參血細(xì)胞中差異表達(dá)蛋白進(jìn)行了研究，并運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)部分差異表達(dá)的蛋白在mRNA表達(dá)水平上進(jìn)行了進(jìn)一步的評(píng)估。結(jié)果如下：
　?。?）成功建立了一具有高分辨率和良好重復(fù)性的刺參血細(xì)胞雙向電泳體系。利用該體系，對(duì)適宜生長(zhǎng)條件和高溫脅迫下飼養(yǎng)7天的刺參的血細(xì)胞全蛋白進(jìn)行了分離。使用PDQuest8.0軟件對(duì)二維凝膠電泳圖譜進(jìn)行生物信

3、息學(xué)分析，約500個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)被檢測(cè)到；表達(dá)量差異1.5倍以上且重復(fù)性較好的的蛋白點(diǎn)27個(gè)，最大表達(dá)差異比率為5.62。運(yùn)用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合 Mascot數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)27個(gè)顯著差異的蛋白點(diǎn)進(jìn)行了鑒定及特征分析，共有23個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)得到成功注釋。其中上調(diào)表達(dá)的蛋白主要有 Hsp60、蛋白二硫鍵異構(gòu)酶、卵黃蛋白、ATP合酶、鈣網(wǎng)蛋白、以及微管蛋白和肌動(dòng)蛋白等，而下調(diào)表達(dá)的蛋白主要有鐵蛋白、鈣調(diào)蛋白、親環(huán)素、酚羥化酶組分等。G